抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测＊

周松峰，廖文军，覃绍敏，袁书智，白安斌，吴健敏

狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus，RV）引起的中枢神经系统感染的急性人畜共患传染病。所有温血动物都可感染，狂犬病一旦发病，病死率几乎100%［1］，是人类病死率最高的急性传染病之一。狂犬病病毒G基因编码的糖蛋白（glycoprotein，GP）是病毒唯一暴露在表面的蛋白［2］，是唯一能刺激机体产生中和抗体的病毒蛋白［3］，在狂犬病毒致病和免疫中起着关键作用［4］。

狂犬病的诊断方法目前主要有中和试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）等，但这些检测方法对仪器和专业人员的依赖性较高，检测成本昂贵，且耗时相对较长，极大的限制了它们在基层单位的应用，由于我国面积辽阔，农村散养犬较多，在开展RV的监测及免疫效果评估时，急需建立一种快速、敏感、稳定，可以现场使用的检测方法。

近年来自体红细胞凝集试验发展迅速［5］，已在多个检测领域得到应用［6－7］。该方法的基本原理是：以红细胞作为指示细胞，利用基因工程方法构建一种重组双功能融合蛋白（目标抗原或抗体与红细胞非凝集型抗体［8］联结而形成的抗原－抗体或抗体-抗体结合物），该融合蛋白既能与红细胞结合又能与被检抗体/抗原结合，通过样品中被检抗体/抗原的桥联作用，使指示红细胞发生凝集，根据指示红细胞的凝集现象达到快速检测的目的。

本实验室利用该技术成功建立了检测猪瘟、猪伪狂犬病毒的红细胞凝集试验［9－10］。因……