透明细胞肾细胞癌中VEGF、Ki－67的表达及其相关性分析＊

福建医科大学省立临床医学院、福建省立医院病理科（福州350001） 晋 龙 刘曙光 眭玉霞

透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell cancer，ccRCC）是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，约占肾细胞癌（Renal cell cancer，RCC）的60%～85%［1］。ccRCC的发生、发展受多种基因调控。血管内皮生长因子（Vascular endothelialgrowth factor，VEGF）能够促进肿瘤血管生成，从而促进肿瘤的增殖、侵袭及转移。Ki－67是细胞增殖的一种标记，其表达与肿瘤的恶性生物学行为和预后相关。本研究通过观察VEGF和Ki－67在人ccRCC组织中的表达情况，探讨其与临床病理因素关系以及二者之间的相关性。

材料与方法

1 材 料 选取2008年7月～2011年9月福建省立医院病理科收集的手术切除ccRCC标本64例，术前均未行放化疗，术后由两位资深病理医师诊断为ccRCC。其中男47例，女17例，年龄36～77岁，≥60岁25例，＜60岁39例；临床分期按2004年 WHO RCC TNM分期标准：I期25例，II期19例，III期14例，Ⅳ期6例；Furhman病理分级：1级27例，2级22例，3级11例，4级4例；淋巴结转移17例。另选取同期15例正常肾组织作为对照。

2 方 法

2.1 免疫组化方法：所有手术切除标本均经l0%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋后行4μm连续切片，每例均行HE染色和SP法免疫组织化学染色、光镜观察。免疫组织化学染色按试剂盒说明书步骤进行。用已知VEGF阳性表达的结肠腺癌组织切片和Ki－67阳性表达的乳腺癌切片作其阳性对照，PBS缓冲液代替一抗分别作阴性对照。VEGF与Ki－67均为鼠抗人单克隆抗体，SP试剂盒及DAB显色剂均购于福州迈新生物技术开发公司。

2.2 结果判定：VEGF阳性细胞为细胞胞浆染成棕黄色或浅黄色，Ki－67阳性细胞为细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒，光镜下随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，以阳性细胞百分率为判断标准，＜10%细胞着色为阴性，10%以上细胞着色为阳性。

2.3 统计学方法：采用SPSS17.0统计学软件，VEGF和Ki－67阳性表达率和各项病理因素的相关性采用χ2检验或确切概率法分析，VEGF与Ki－67二者之间表达关系采用Spearman相关分析。

结 果

1 VEGF、Ki－67表达与ccRCC临床病理特征的关系：ccRCC中VEGF、Ki－67阳性表达率分别为71.88%（46／64）、53.13%（34／64），而正常肾组织分别为26.67%（5／15）、13.33%（2／15），差异均有统计学意义（P＜0.05）。VEGF和 Ki－67的阳性表达率与临床分期、Furhman病理分级及淋巴结转移密切相关，而与患者性别、年龄无明显相关，见表1。

表1 VEGF、Ki－67表达与ccRCC临床病理特征的关系（例）

2 VEGF与 Ki－67表达的相关性分析：64例ccRCC组织中，VEGF和Ki－67同时表达性者29例（45.31%），同 时 表 达 阴 性 者 13 例 （20.31%），仅VEGF表达者17例（26.56%），仅 Ki－67表达者5例（7.81%），采用Spearman相关分析，结果显示 VEGF与Ki－67的表达呈显著正相关（P＝0.011）。

表2 VEGF与Ki－67表达的相关性

讨 论

肾细胞癌（RCC）是泌尿系最常见的肿瘤之一，以高发局部侵袭和远外转移为特点［2］，近年来，其发病率和病死率均呈上升趋势。透明细胞肾细胞癌（ccRCC）是其中最常见的病理类型，其浸润和转移是一个由多个基因参与的复杂的过程。

研究证实，恶性肿瘤的生长和转移与血管生成密切相关，肿瘤细胞可诱导血管生成，并依赖血管生成进行侵袭性生长和转移，而抑制血管生成能显著抑制肿瘤的生长。VEGF是一种由正常组织细胞或肿瘤细胞分泌的糖蛋白，分子量为34～45KD，是肿瘤血管形成过程中作用最强、特异性最高的血管增生因子，其主要功能是通过与内皮细胞上的酪氨酸激酶受体结合，诱导内皮细胞分裂、游走和增殖，促进血管生成，同时使新生微血管通透性增加，促进血浆蛋白外渗形成纤维蛋白网，有利于肿瘤细胞进入血管，促进肿瘤浸润转移［3］。研究表明，肝癌、胃癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤中都存在VEGF过度表达，且与肿瘤的分级分期有关［4，5］。在本组研究中，ccRCC 组织中 VEGF 表达明显高于正常肾组织，且VEGF表达随着临床分期、病理分级增加和淋巴结转移而增强，由于RCC的血运非常丰富，高表达VEGF的预示肿瘤侵袭及转移几率高，患者预后不良，另一方面也提示，抑制VEGF通路的靶向药物可能有助于延长ccRCC患者的生存期，并减缓肿瘤进发展。

肿瘤细胞的增殖是肿瘤分化与转移的重要影响因素。Ki－67是增殖细胞中表达的一种抗原，是由分子量为345KD和395KD两条多肽链组成的核蛋白，其基因位于10号染色体上。Ki－67表达与细胞周期密切相关，在G2、M 期表达最强，而在 G0、Gl早期不表达。Ki－67半衰期短，细胞脱离增殖周期后迅速被降解，被认为是一个可靠、全面反映肿瘤细胞增殖活性的标志物。目前研究显示，胃癌、膀胱癌、大肠癌、乳腺癌及淋巴瘤等多种肿瘤中Ki－67呈过量表达，并与肿瘤的恶性生物学行为和预后密切相关［6］。本研究发现ccRCC组织中Ki－67表达明显高于正常肾组织，Ki－67表达与ccRCC临床分期、病理分级和淋巴结转移相关，说明Ki－67的表达与ccRCC的恶性程度及预后有关。

此外，本研究结果还显示VEGF与Ki－67的表达呈正相关，与张鲁东等［6］研究结果一致。说明ccRCC血管的生长越丰富，肿瘤细胞的增殖能力越强，二者在促进肿瘤新生血管形成和肿瘤细胞过度增殖的机制中可能存在协同作用，VEGF和Ki－67共同表达阳性提示患者预后相对较差。

图1 VEGF在透明细胞肾细胞癌组织中呈阳性表达

图2 Ki－67在透明细胞肾细胞癌组织中呈阳性表达

［1］ 谈宜傲，周林玉，石结武.CXCR4在肾透明细胞癌组织中的表达及意义［J］.山东医药，2011，51（11）：29－30.

［2］ Uzzo RG，Cherullo EE，Myles J，etal.Renal cell carcinoma invading the urinary collecting system：implications for staging.J Urol，2002，167（6）：2392－2396.

［3］ Daniel VallbÖhmer MD，Jeffrey H.Peters MD，etal.Molecular determinant in targeted therapy for esophageal adenocarcinoma［J］.Arch Surg，2006，141（5）：476－482.

［4］ Pourgholami MH，Morris DL.Inhibitors of vascular endothelial growth factor in cancer［J］.Cardiovasc Hematol Agents Med Chem，2008，6（4）：343－347.

［5］ Des Guetz G，Uzzan B，Nicolas P，etal.Microvessel density and VEGF expression are prognostic factors in colorectal cancer.meta－analysis of the literature［J］.Br J Cancer，2006，94（12）：1823－1832.

［6］ 陈 燕.Her－2和 Ki－67在结肠癌中的表达及其意义［J］.临床军医杂志，2009，37（5）：787－789.

［7］ 张鲁东，李延江，骆 磊，等.Ki－67和VEGF在肾细胞癌中的表达及意义［J］.临床军医杂志，2009，37（6）：975－977.