自制NSE单抗的鉴定及其双抗夹心ELISA方法的建立①

丁焕弟 林志妙 杨 赟 于占娇 龚慧婷 李晓彤

(厦门大学生命科学学院杂交瘤抗体中心，厦门361005)

神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)是烯醇化酶的一种同工酶，烯醇化酶是普遍存在于生物体内的糖酵解代谢酶，它催化中间产物磷酸烯醇式丙酮酸的生成。目前已发现5种烯醇化酶的同工酶，由3种免疫性质不同的亚基(α、β、γ)组成，分别是 αα、ββ、γγ、αβ、αγ，已经证明这 3个亚基来自不同的基因位点［1］。α亚基主要存在于肝、肾等组织，故称其为非神经系统的烯醇化酶(NNE);β亚基主要存在于骨骼肌和心肌，故称其为肌肉特异性的烯醇化酶(MSE);γ亚基主要存在于神经组织，γγ型特异定位于神经元和神经内分泌细胞中，故命名为神经元特异性烯醇化酶［2］。

通过研究神经元和神经内分泌细胞起源的肿瘤，如小细胞肺癌患者血清及脑脊液中NSE水平明显升高，提出通过对这些患者血清NSE活性水平变化的监测，可以达到监测病情发展，评价治疗效果，及早提示复发情况的目的。

本文希望通过制备效价高、特异性好、能识别人体内NSE蛋白的单克隆抗体，并用此抗体建立双抗夹心ELISA试剂盒。

1 材料与方法

1.1 材料 PEG、HT、HAT、RPMI1640 培养基、抗体亚型鉴定试剂盒、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG以及荧光标记的羊抗鼠IgG均购自Sigma公司;小牛血清购自Gibco。辣根过氧化物酶(HRP)购自泰天和生物公司，其他生化试剂均为国产分析纯试剂。

1.2 方法

1.2.1 NSE单克隆抗体的制备及亚型鉴定 取小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按常规方法进行细胞融合［3］，通过间接 ELISA 法筛选［4］，采用有限稀释法进行数次亚克隆，获得可稳定分泌NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株，按常规方法制备腹水并纯化。……