采用PCR法对乙型肝炎病毒基因型检测的临床观察与分析

夏献颗 郭佐华

（湘潭县人民医院检验科，湖南 湘潭 411228）

目前乙型肝炎病毒临床基因分型为A～H共8个基因型，并且还可能同人类感染乙型肝炎病毒途径、疾病进展、药物抗病毒治疗效果存在一定关系，但是乙型肝炎病毒基因型还存在地区分布差异性，检测方法也存在多样，致使研究结论各有差异，本研究采用分型准确率高、操作相对简单的基因型特异性引物聚合酶链反应法（以下简称PCR法）对我院2010年6月至2011年5月收治的部分乙型肝炎病毒感染者血清实施了基因型检测、分析，现将其报告如下。

1 资料与方法

从我院2010年6月至2011年5月收治的乙型肝炎病毒感染者中将存在甲、丙、戊等其他肝炎病毒感染及其他可引发肝脏病变疾病的患者排除，选取430例患者血清进行乙型肝炎病毒基因型检测、分析，其中男性372例，女性58例，年龄2至65岁，平均（33.2±14.85）岁，病程1～40年，平均（9.84±11.01）年。所有患者入院诊断均符合《病毒性肝炎防治方案》（2000年全国病毒性肝炎西安学术会议所制订），其中乙型肝炎病毒携带者91例、慢性乙型肝炎206例、急性乙型肝炎10例、肝炎肝硬化110例、原发性肝癌13例。血清采集后在-70℃下保存。

1.2 仪器和试剂

采用美国Promega公司的核酸提取试剂盒，上海生工生物技术公司的Taq DNA和dNTP聚合酶，上海华美生物工程公司的HBeAg检测试剂盒、琼脂糖、phiX174 DNA/HaeⅢDNA分子量标志物。德国台式高速离心机、PCR凝胶成像仪、热循环仪。

1.3 基因分型检测

将待检血清50μL加入60μL裂解液中并使其混匀，行10min 37℃水浴后，分别加入49∶1的氯仿/异戊醇和Tris饱和酚各30μL并充分混匀，再行10min的14000r/min离心，取上清液。……