双向凝胶电泳和二维色谱技术检测大肠癌蛋白质谱的意义

李 峰 师庆红 张晓静 何成彦 赵丽纯 郭宏华 (吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 30033)

大肠癌(colon cancer)是一种常见的消化道恶性肿瘤，死亡率在世界范围内居各种肿瘤的第三位，在西方居第二位，并且发病率和死亡率均有逐年上升的趋势〔1，2〕。大肠癌的发生和发展受到基因和环境等多种因素的影响，其病理机制复杂，从单一的基因突变和分子通道的变化难以全面理解大肠癌的发生机制。蛋白质组学是近年来发展起来的新兴学科，已经广泛应用于肿瘤研究的诸多方面。本文拟采用双向凝胶电泳和二维色谱技术分析Dukes B期大肠癌肿瘤与癌旁组织蛋白质的差异性，为大肠癌的早期诊断、生物学治疗寻找新的靶点。

1 材料与方法

1.1 组织标本 收集吉林大学中日联谊医院手术治疗的大肠癌患者18例，年龄49～78岁，其中男13人，女5人。在手术中获得的癌组织均是新鲜标本。所获得的癌旁正常组织均距离癌边缘10 cm之外、切缘正常组织，并且所取的正常组织标本均是在癌组织上端。标本离体后立即取材，生理盐水冲洗，放入液氮冷冻，－80℃保存。病人术前未接受任何治疗。取部分组织标本进行石蜡包埋、切片、HE常规染色，病理学检查证实组织类型，均是Dukes B腺癌。

1.2 主要试剂 载体两性电解质(Bio－Lyte 3－10)、IPG预制胶条(pH3～10，17 cm;pH5～8，17 cm)、矿物油、碘代乙酰胺(IAA)购自 Bio－Rad 公司(Hercules，CA，USA)。尿素、硫脲、精胺、蔗糖、甘油、三羟甲基氨基甲烷、3－〔(3－胆酰胺丙基)－二乙胺〕－丙磺酸(CHAPS)、丙烯酰胺、N，N，N′，N′－四甲基乙二胺(TMED)、甘氨酸、十二烷基磺酸钠(SDS)、溴酚蓝、考马斯亮蓝G－250、苯甲基磺酰氟(PMSF)购于 Sigma 公司(St Louis，MO，USA)。……