一株新型鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定

陈宗艳，朱英奇，王世传，李传峰，李 露，王玢缤，付玉志，高景鹏，王 超，刘光清

（1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2.安徽省全椒县畜牧兽医局, 全椒 239500）

2011年上半年，中国太湖流域的许多养鸭场陆续发生一种新的鸭病毒性传染病，临床主要表现为发病雏鸭软脚，排白色稀粪，发病率约20%～60%，病死率在80%以上，给养鸭业造成了较为严重的经济损失。该类病例的临床病变主要为：肝脏呈土黄色，质脆，有点状、斑块状出血，或黄白色坏死灶；脾脏肿大、出血，呈暗红色，有多处大小不等的淡黄色坏死灶；其他脏器也表现出不同程度的肿大或出血等。为了查明该病的病原，我们对采集的病死鸭病料进行了病原分离和鉴定。初步研究结果表明，造成该次疫情的病原是一种不同于番鸭呼肠孤病毒的新型呼肠孤病毒。

1 材料与方法

1.1 材料 病料采集于安徽省太湖县某养鸭场；SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司；SPF鸭胚购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.2 试剂 Tissue DNA/RNA Kit 、PremixTaqTM（ExTaqTMVersion）、DNA Marker（DL2000）购自TaKaRa公司；DMEM细胞培养液、胎牛血清购自GBICO公司。

1.3 病毒分离 将病料剪碎，按1:5体积加生理盐水，匀浆器匀浆后反复冻融3次，10 800×g、4 ℃离心30 min，吸取上清液，0.22 μmol/L滤膜过滤除菌。取上述滤液接种按常规方法[1]制备的鸭胚成纤维细胞（Duck embryo fibroblasts, DEFs），出现病变时收集细胞液。过滤除菌的滤液同时经尿囊腔途径接种9日龄鸡胚10枚，接种量为0.2 mL/枚。接种后，置37 ℃生化培养箱恒温孵化。弃去24 h内死亡的鸡胚，每间隔12 h观察一次，收获死亡的胚体及尿囊液并记录结果。……