茜草双酯对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用研究

黄桥华 刘心强 邱倩

缺血-再灌注损伤已经成为威胁人类生命的一个病理生理改变而越来越受到研究者的关注。心肌细胞凋亡是缺血-再灌注损伤的重要表现形式，尤其在缺血-再灌注早期，心肌细胞凋亡作用更为明显。多年来，研究各种药物对缺血-再灌注损伤及心肌细胞凋亡的影响一直是科研热点，也是此领域急需解决的课题之一。因此寻找有效的药物来抑制细胞凋亡对防治心肌缺血-再灌注损伤具有重要意义。本研究通过建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型，使用茜草双酯的干预，探讨茜草双酯对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物为清洁级出生1～3 d的Sprague-Dawley(SD)大鼠的乳鼠，雌雄不限，由赣南医学院实验动物中心提供。

1.1.2 茜草双酯购自上海第二制药厂，DMEM培养基、胰蛋白酶、5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)购自Sigma公司，胎牛血清(南美产)购自Hyclone公司，乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒、丙二醇(MDA)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，细胞凋亡和坏死检测试剂盒购自江苏碧云天生物技术研究所。

1.2 方法

1.2.1 原代心肌细胞培养 出生1～3 d的SD大鼠的乳鼠，消毒后取心脏，剪碎后用0.08%的胰蛋白酶消化液消化，用含15%胎牛血清的高糖DMEM终止消化，离心后重悬细胞，吹打均匀后经200目细胞筛滤去细胞团和未消化的组织块，细胞计数后调整细胞浓度约5×105个/ml，接种至培养瓶中，差速贴壁法分离心肌细胞，加入0.1 mmol/L的BrdU纯化心肌细胞，放入37℃CO2培养箱中培养24 h更换培养基，之后根据细胞生长情况1～2 d更换培养基。……