叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

张景燕 陈 娟 王 蓉 赵静姝 吴燕川

(首都医科大学宣武医院中心实验室神经变性病教育部重点实验室北京老年病医疗研究中心，北京100053)

老年性痴呆(Alzheimer disease，AD)是一种以进行性认知功能损害和记忆力减退为主要特征的中枢神经系统退行性疾病。随着人口老龄化不断加剧，AD的发病率和患病率逐年增加，研究如何防治AD、降低发病率势在必行［1］。Piazza等［2］认为机体内同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)增高可致神经细胞毒性，是诱发AD的因素之一，而Hcy是含硫的氨基酸，需要通过人体必需氨基酸甲硫氨酸(Hcy的唯一前体)代谢脱去甲基后形成。体内Hcy浓度受到各种因素的影响，最常见的如饮食中叶酸和维生素B12缺乏，即可引起Hcy浓度增高，从而导致AD的发生［3］。本实验拟通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的影响，探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1)细胞株:人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞来自瑞典卡罗琳斯卡医学院。

2)试剂:叶酸和维生素B12系SIGMA-ALDRICH公司产品。MTT〔噻唑蓝，3-(4，5-dimethylthyl thiazo-l 2-yl)-2，5diphenyltetrazolium broide〕系 Sigma公司产品。二甲基亚砜(DMSO)系北京亚太精细化工公司产品。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)检测试剂系北京森美希康试剂公司产品。

1.2 方法

1)细胞培养:用含10%胎牛血清的MEM培养基，于37℃，5%CO2培养箱中培养，6 d传代1次，中间换液1次。

2)MTT代谢率测定:将生长良好、传代稳定的SH-SY5Y细胞以1×104/mL的密度接种于96孔板(Nunc产品)，每孔体积200 μL，48 h后分为4组进行实验。包括:对照组、叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组，各组细胞数及培养液体积均相等，于接种后第3天，每孔加MTT(5 g/L)20 μL，37℃孵育4 h，吸出培养液，每孔加入 DMSO 200 μL，振摇 10 min，用全波长酶标仪(multiskan spectrum)测定550 nm处吸光度值(A)。……