载脂蛋白M可能经NF-κB介导大鼠肾缺血再灌注损伤

唐 华，张春梅，陈 蓉，黄 珀，万 英，曾维诚

(泸州医学院1.病理生理学教研室;2.医学机能学实验室，四川泸州646000)

载脂蛋白M(apolipoprotein M，APOM)是最近发现的一种新型载脂蛋白，主要在肝细胞和肾小管上皮细胞特异性表达［1－2］。肝脏表达的APOM可能与血脂的代谢与转运相关［3］，而肾脏表达APOM的生理意义尚不明确。肝细胞核因子1α(hepatic nuclear factor-1α，HNF-1α)、肝 X 受体(hepatic X receptor，HXR)等炎性相关转录因子能调节APOM在体内或体外 HepG2细胞的表达［4－7］，表明 APOM 可能参与炎性反应，但炎性反应的关键转录因子NF-кB与APOM的关系目前尚不清楚。

肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)在临床上常见于失血或中毒性休克及肾移植等，是决定移植肾存活和患者生存率的主要因素之一。据报道，由NF-кB介导的炎性级联反应在肾IRI过程中发挥重要作用［8］。本研究采用肾缺血再灌注大鼠模型，分别从基因和蛋白水平检测肾组织APOM的表达及NF-кB抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamat，PDTC)对 APOM 表达的影响，旨在探讨APOM参与肾IRI的发病机制。

1 材料与方法

1.1 实验分组和标本采集

清洁级75只250～300 g雄性SD大鼠［泸州医学院动物实验中心提供，合格证号:SCYK(川)2006-0004］随机分为3组:假手术组、肾缺血再灌注模型(IRI)组和PDTC干预组(IRI+PDTC)，各组按取材时间又分为再灌注3、6、12、24和48 h组，每组5只。肾 IRI模型按常规制作［9］，PDTC 组在术前0.5 h腹腔注射PDTC(Sigma公司)100 mg/kg，假手术组和IRI组注射等量0.9%氯化钠注射液。于再灌注各时间点再次开腹，下腔静脉取血3 mL用于检测血肌酐(creatinine，Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN);同时切除左肾，分离肾皮质用于提取总RNA、胞质蛋白和核蛋白;其余肾组织常规制片，HE染色观察肾脏病理改变。

1.2 实时荧光定量PCR检测APOM mRNA的表达

用Trizol试剂(Invitrogen公司)提取总RNA，反转录成cDNA。……