山东种公猪精液携带主要病原的检测

王军一，金扩世，徐敬龙

（1.临沂市畜牧站，山东临沂276004；2.军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春130041；3.济南澳利生物工程有限公司，山东济南250306）

猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）、猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV－2）和猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）可以引起以妊娠母猪流产、早产、产死胎及木乃伊胎等为特征的繁殖障碍性疫病，是当前严重危害我国养猪业的主要病原。这些病原除了可以通过接触传播外，更能通过交配或精液输入而扩散。

目前，规模猪场普遍采用人工授精技术，2007年，国家大力实施生猪良种繁育补贴项目，进一步推广人工授精技术。因此，如果公猪精液携带这些病原，则很容易通过精液传播，从而加大了病原传播的速度和广度，增加了防控工作的难度和复杂性。为了解山东地区种公猪精液的带毒情况，为制定科学有效的防控措施提供依据，应用PCR技术对山东部分种猪场或人工授精站公猪精液进行了上述5种病毒的检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 公猪精液样品 从2007年－2009年共采集来自山东各地38个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品727份，其中包括种猪场11个423份，普通规模猪场13个258份，人工授精站14个46份。

1.1.2 主要试剂 M－MLV反转录酶、RNA 酶抑制剂、Ex－Taq DNA 聚合酶、d NTPs、DNA 标准，以及病毒核酸提取试剂盒TaKaRa MiniBEST Viral RNA／DNA Extraction Kit均购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.1.3 PCR引物 CSFV采用罗廷荣等［1］报道的引物，CSFV1：5′－GCT CCT GGT TGG TAA CCT CGG－3′；CSFV2：5′－TGA TGC TGT CAC ACA GGT GAA－3′，预计扩增目的片段长度分别为508 bp。

PRRSV 采用娄高明等［2］报道的引物，PRRSV1：5′－ATG GCC AGC CAG TCA ATC A－3′；PRRSV2：5′－TCG CCC TAA TTG AAT AGG TG－3′，预计扩增目的片段长度为433 bp。

PRV引物采用猪伪狂犬病病诊断技术标准（GB／T18641－2002），预计扩增目的片段长度为217 bp。……