褪黑素对脊髓损伤早期大鼠神经生长因子表达的影响

徐玉生，马玉斐，李星晨，曾冠楠

郑州大学第一附属医院骨科 郑州 450052

脊髓原发机械损伤后会引起一系列级联式的病理变化，主要包括局部微循环障碍、氧化应激[1]、中性粒细胞浸润[2]、细胞坏死和凋亡[3]等，而脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)往往又是全身多发创伤的一部分，患者病情常常复杂而严重。目前治疗SCI疗效确切的药物并不多，其中最常用的是甲基强的松龙(methylprednisolone，MP)，但应用 NASCIS 24 h给药方案可引起继发于MP的急性内固醇性肌病[4]，大剂量MP还可能引发肺部及胃肠道并发症，易导致高龄者呼吸系统并发症及感染[5]。褪黑素(melatonin，MT)是由松果体产生的一种作用广泛且功能强大的吲哚类激素，具备抗肿瘤、调节生物体昼夜节律、抗氧化及清除自由基、镇痛及免疫调节[6-7]等作用，对SCI有较强的治疗作用，但对其机制的研究大多局限于抗氧化及清除自由基方面。作者通过观察MT对SCI大鼠血清神经生长因子(nerve growth factor，NGF)水平、脊髓组织内NGF mRNA和蛋白表达水平的影响，探讨MT治疗SCI的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 ①实验动物:SPF级健康成年雄性SD大鼠60只，体质量(350±30)g，购自河南省实验动物中心，许可证号:SCXK(豫)2010-0002。②主要试剂及仪器:Trizol试剂、EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix试剂盒、EasyTaq DNA Polymerase试剂盒均购自北京全式金生物技术有限公司;大鼠NGF检测试剂盒购自美国RD公司;兔抗鼠NGF抗体、DAB试剂盒、SP9002免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;MDA测定试剂盒、总SOD测定试剂盒均购自南京建成科技有限公司;MT购自美国Sigma公司。PCR GeneAmp System(美国Applied Biosystems公司);D-140图像记录分析系统(大连Jim-X Scientific公司)。

1.2 动物模型的建立 大鼠以水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定于手术台上。……