兔IL-6真核表达质粒的构建及其分子佐剂效应的初步研究

张夏兰，杨 鑫，周英顺，王红宁*

（1.四川农业大学动物科学院，四川 雅安 625014；2.四川大学生命科学学院，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室，四川 成都 610064；3.重庆市巴南区动物疫病预防控制中心，重庆 401320）

哺乳动物白介素6是一种多功能细胞因子，又称为B细胞分化因子、干扰素J32及肝细胞刺激因子。白介素6在哺乳动物具有广泛的生物学活性，几乎能影响免疫系统的所有细胞，在调节免疫应答、影响急性期的蛋白应答和造血功能等方面发挥重要作用，并与其它细胞因子相互协调，共同构成复杂的细胞因子网络。研究表明[1－4]，哺乳动物和禽类的IL－6具有免疫佐剂效应，能增强免疫应答，同时还有资料显示[5]，细胞因子基因真核表达质粒能够增强疫苗的免疫效果。基于以上研究，本研究构建了中国白兔白介素6基因真核表达质粒pcDNA－IL－6，并与WHNRH株RHDV[6]核酸疫苗pcDNA－VP60、兔瘟组织灭活苗分别共同注射家兔后，观察其对家兔免疫应答的影响。

1 材 料

实验动物为20日龄、600～700 g的RHD非免疫中国白兔50只。质粒pMD18－T－IL－6和真核表达质粒pcDNA－VP60系本实验室构建并保存。人“O”型红细胞由成都市血站提供。溶菌酶、PEG8000，NH4Ac，异丙醇，NaOH，胰蛋白胨，酵母抽提物，小牛血清，葡萄糖，醋酸钠，冰乙酸，氯仿，苯酚，无水乙醇均为分析纯。

2 方 法

2.1 真核表达质粒pcDNA－IL－6的构建

将本实验室保存的pMD18－T－IL－6与pcDNA3.1（＋）真核表达载体质粒经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切后，进行连接，并转化JM109细菌。对重组质粒进行酶切及PCR鉴定后，送大连宝生物公司测序。重组质粒命名为 pcDNA－IL－6。

2.2 质粒的大量提取及纯化

质粒DNA的大量提取，采取碱裂解法；……