异基因造血干细胞移植受者CMV检测方法的比较

郝新建，周 健，房佰俊，张䶮莉，符粤文，魏旭东，宋永平

(1.郑州大学第一附属医院血液科 河南郑州 450052;2.郑州大学附属肿瘤医院血液科 河南郑州 450008)

近年来，多种免疫抑制剂联合应用使异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)得到快速的发展。allo-HSCT受者人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，CMV)感染极为普遍［1］，活动性CMV感染是继发曲霉菌、细菌混合感染的高危因素，且不易与细菌、真菌感染区别;其引起的间质性肺炎是器官移植失败重要原因之一［2］。目前更昔洛韦(GCV)的使用使CMV疾病的治疗有了较大转机，只要能找到移植后受者出现CMV活动的证据，虽无临床表现，可给予GCV预先性治疗。但取得预先性治疗疗效的切入点在于早期发现CMV活动，CMV多引起潜伏感染，早期所致疾病的临床表现多为非特异性，所以早期诊断主要依靠实验室检查。因此，建立早期快速、灵敏特异、可靠的CMV检测和鉴定方法，提高检测效率是所有环节的关键。本研究应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IgM抗体和荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血浆DNA定量，旨在比较allo-HSCT后早期有效诊断CMV感染的方法。

1 材料和方法

1.1 主要试剂与仪器 酶联免疫检测仪(芬兰)、荧光定量PCR检测仪(日本大和公司)、人类巨细胞病毒核酸扩增荧光检测试剂盒(罗氏公司)、巨细胞病毒IgM抗体ELISA试剂盒(上海森雄公司)。

1.2 标本来源 642份外周血标本取自2006年10月至2011年10月在我科行allo-HSCT的57名受者。

1.3 方法

1.3.1 ELISA检测血清IgM抗体:按试剂盒说明操作和判定结果。

1.3.2 荧光定量PCR检测血浆DNA含量:①分离DNA:取2 ml静脉血EDTA抗凝，1 600 r/min离心20 min;取100 μl血浆与100 μl DNA提取液1振荡混匀，1 300 r/min离心15 min，弃上清;加入50 μl DNA提取液2，振荡混匀，100℃沸水浴/干浴10 min，1 300 r/min离心10 min，保留上清待用。……