山苍子枝和叶中总黄酮含量的测定

陈湛娟，刘秀萍，毕和平*，肖宝东

（1.海南师范大学化学与化工学院，“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158；2.晋中学院 化学化工学院，山西 晋中 030600）

山苍子（Litsea cubeba），为落叶灌木或小乔木，又名木姜子、山鸡椒、山胡椒等，广布于我国南部各省区，民间用其叶、子和根治痈疖肿痛，乳腺炎，虫蛇咬伤，预防蚊虫叮咬，感冒头痛，消化不良，胃痛等[1-4].黄酮类化合物具扩张冠脉、止血、镇咳、祛痰及软化血管，抗氧化自由基活性等多种生物活性[5].本文以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色系统，采用紫外分光光度法测定山苍子中总黄酮的含量，研究结果可为山苍子的开发利用提供科学依据.

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；FA1604型电子分析天平（上海精科天平）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）等.

芦丁标准品（购自中国食品药品检定研究院，纯度≥98%），甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为国产分析纯.实验用水为蒸馏水.

山苍子枝和叶采自海南省尖峰岭，经海南师范大学钟琼芯高级实验师鉴定为Litsea cubeba的枝和叶，自然凉干，粉碎备用.

1.2 样品溶液的制备

称取干燥至恒重的山苍子枝和叶各5.0 g，分别置于索氏提取器中，用石油醚加热回流至无色，弃去提取液.待残渣中石油醚自然挥发后，用甲醇提取至无色，将提取液浓缩后，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，混匀备用.

1.3 标准溶液制备与测定波长的确定

精确称取20 mg芦丁标准品（已干燥至恒重），置于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀.即得浓度为0.2 mg/mL的芦丁标准品溶液.

参照文献[6]确定测定波长.在450～600 nm波长范围内，用双光束紫外可见分光光度计扫描.实验表明，标准品溶液在496 nm处有最大吸收峰.

1.4 标准曲线的绘制

参照文献[7-8]并作改进，分别吸取芦丁标准液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 mL于25 mL容量瓶中，余下步骤文献[6]的方法操作.用空白溶剂作参比，在波长为496 nm处用分光光度计测吸光度.以浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线.得回归方程A=0.01033C+0.00846，相关系数：r=0.9994.标准曲线见图1.

图1 标准曲线图Fig.1 Standard curve

2 结果与讨论

2.1 含量测定

分别吸取山苍子枝和叶的提取液各1 mL置于25 mL容量瓶，余下按1.4项下步骤操作，用分光光度计在496 nm处平行测定5次，同时用空白溶剂作对照.根据回归方程计算各提取液中总黄酮含量，计算结果见表1.

2.2 精密度和稳定性

按1.4项下方法，平行测是5次，测定结果见表1.山苍子枝提取液的测量相对标准偏差RSD为1.31%，叶提取液的RSD为0.66%，精密度良好.

表1 山苍子枝和叶总黄酮含量测定结果Tab.1 Determination of total flavonoid in branches and leaves of Litsea cubeba

分别吸取枝和叶提取液各1份，按1.4项下步骤操作，每隔15 min测1次吸光度，共测5次，测定结果见表2.表明在实验测定的时间内，该方法的显色结果是稳定的.

表2 稳定性试验Tab.2 Stability test

2.3 加标回收率

分别吸取已知含量的枝和叶的提取液各1 mL于25 mL容量瓶中，加入0.2 mg/mL的芦丁标准液0.5 mL，余下步骤按1.4项下操作，在496 nm处平行测定，同时用空白作对照.计算加标回收率，结果见表3.得枝和叶的平均回收率分别为100.70%和104.30%，RSD分别为3.14%和1.94%.

表3 加标回收试验Tab.3 Recovery test

本文以芦丁为标准品，以石油醚去除脂溶性物质和叶绿素的干扰后，用甲醇提取山苍子中的总黄酮，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色系统，用紫外分光光度法测定山苍子枝和叶中黄酮类物质的含量，操作方法简便，测量结果准确可靠，重复性好，研究结果可为山苍子的开发利用提供科学依据.

[1]陈湛娟,范超君,毕和平.山苍子总三萜酸含量的测定[J].广东化工,2012,39（7）：161-162.

[2]陈湛娟,范超君,鲍长余,等.姜子属植物的化学成分和生物活性研究综述[J].海南师范大学学报：自然科学版,2011,24(2)：187-191.

[3]王旭,杨关锋.我国山苍子开发利用的现状与发展对策[J].经济林研究,2010,28(3)：136-139.

[4]李经纬,余瀛鳌,欧永欣,等.中医大辞典[M].北京：人民卫生出版社,1995：213.

[5]赵克健.现代药学名词手册[M].北京：中国医药科技出版社,2004：561.

[6]毕和平,韩长日,王芳,等.分光光度法测定破布叶中总黄酮[J].广东化工,2006,33(3)：43-45.

[7]毕和平,韩长日,陈明松.光度法测定杜仲藤中总黄酮[J].理化检验-化学分册,2008,44(5)：453-454.

[8]毕和平,韩长日,张连华,等.海南木莲总黄酮含量的测定[J].海南师范大学学报：自然科学版,2005,18(4)：347-350.