转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的重组优化表达

王 坤，杨慧林，王 斌，潘 力

（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006）

转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的重组优化表达

王 坤，杨慧林，王 斌*，潘 力

（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006）

茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）转谷氨酰胺酶酶原（pro-transglutaminase，pro-TG）在重组大肠杆菌中的表达量低，限制了其在食品、化妆品、纺织行业中的应用。通过对转谷氨酰胺酶酶原的基因序列进行密码子优化，降低其GC含量，提高了它在大肠杆菌中的表达水平，结果表明经优化后转谷氨酰胺酶原的表达量达到了优化前的4.4倍。为提高转谷氨酰胺酶的比活力，通过基于融合PCR的定点突变技术将转谷氨酰胺酶第二位的丝氨酸突变为脯氨酸，突变后转谷氨酰胺酶的比活力达到了突变前的1.26倍。上述研究结果表明，密码子优化及定点突变技术可以应用于优化转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的表达。

转谷氨酰胺酶酶原，密码子优化，定点突变，大肠杆菌，表达

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）、E.coli Mach1T1、E.coli BL21（DE3）、表达载体pET22b（+） 本实验室保藏；密码子优化后的pro-MTG基因 由上海旭冠生物科技有限公司合成，连接在PEs载体上（PEs-proTG），密码子优化的依据主要是降低基因的GC含量，降低自由能，增加mRNA的稳定性；pSIMPLE-18 EcoRV/BAP Vector 购于宝生物工程（大连）有限公司；基因组DNA提取试剂盒、质粒提取试剂盒、胶回收试剂盒 购于北京普博欣公司；KOD-plus-Neo DNA聚合酶 购于东洋纺；限制性内切酶NdeI、XhoI、T4polynucleotide Kinase 购于Fermentas公司；PCR引物 由Invitrogen合成；其余试剂 国产分析纯。

Mastercycler gradient PCR仪 德国eppendorf公司；超声细胞破碎仪 浙江新芝公司；……