翻白草总黄酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

刘文泊 许本善 王德厚 张 峰 (泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

翻白草总黄酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

刘文泊 许本善 王德厚 张 峰 (泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

目的 研究翻白草总黄酮对小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其可能机制。方法 小鼠随机分为4组，即假手术组、模型组及翻白草总黄酮高、低剂量组。采用双侧颈总动脉阻断法制备小鼠I/R损伤模型，Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力，酶联免疫标记法检测小鼠脑组织中髓过氧化物酶(MPO)活性及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6的含量。结果 翻白草总黄酮可改善小鼠学习及记忆能力，降低I/R损伤小鼠脑组织MPO活性及TNF-α、IL-6的含量。结论 翻白草总黄酮对I/R损伤小鼠有保护作用，其机制与其抗炎作用有关。

翻白草总黄酮;I/R损伤;MPO;TNF-α;IL-6

翻白草为蔷薇科植物，在我国分布极为广泛，应用历史悠久，多种医药典籍中均有记载，其主要功效为清热解毒，凉血止血〔1〕。现代医学研究表明，翻白草具有消炎镇痛、抗菌、抗氧化、降血糖等作用〔1～3〕。翻白草富含黄酮类成分〔4，5〕，具有重要开发价值。本研究旨在探讨翻白草总黄酮对小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用，并探讨其可能的机制，为其临床应用于缺血性脑血管疾病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

健康昆明种小鼠60只，雌雄兼用，体重(25±2)g，由泰山医学院动物中心提供，合格证号：鲁动质字070103。翻白草购于泰安市场，经我院中药学教研室鉴定;总黄酮采用超声法提取，按文献方法〔5〕检测含量为22.4 mg/g生药。考马斯亮蓝染色试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒，购于南京建成生物公司;白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒，购于北京环亚泰克生物医学技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验分组及给药 实验前1 d采用Y形迷宫对小鼠进行筛选，淘汰反应过于迟钝或特别敏感的小鼠。将筛选合格的60只小鼠随机分为4组，每组15只，即假手术组(进行手术，但不进行脑I/R)、I/R模型组及翻白草总黄酮(FPB)高、低剂量组，采用灌胃给予 5、2.5 mg·kg－1·d－1FPB，1 次/d，连续 3 d。假手术组、模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。

1.2.2 脑I/R模型制备 末次给药后1 h，用水合氯醛(4%，0.1 ml/10 g腹腔注射)麻醉小鼠，常规消毒颈部皮肤，将小鼠仰卧固定，切开颈部皮肤，分离两侧颈总动脉，用缝合线打活结，缝合颈部皮肤。脑I/R时，提起活结阻断双侧颈总动脉5 min，立即松开再灌注25 min。

1.2.3 学习记忆能力的检测 术后24 h，筛选清醒活跃小鼠继续给药2 d，末次给药1 h后进行脑缺血再灌注，随即采用Y型迷宫检测小鼠学习能力，次日检测记忆能力。电压范围50～90 V。检测时先放入小鼠使其适应3 min，然后给小鼠以电刺激，随机改变电击区和安全区，小鼠遭遇电击时直接逃至安全区为正确反应，否则为错误反应。电击15次，记录正确次数。24 h后再次测定小鼠连续遭遇15次电击的正确反应次数。

1.2.4 脑组织MPO活力及TNF-α、IL-6含量测定 脱臼处死小鼠，断头取脑，用冰生理盐水洗去血液，滤纸吸干，将脑组织制成10%匀浆，4℃离心(3 500 r/min，10 min)，取上清，按照试剂盒操作步骤进行检测。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 FPB对I/R损伤小鼠学习记忆能力的影响

模型组小鼠正确次数明显低于假手术组小鼠，24 h后检测正确率有所提高，但仍然显著低于假手术组。与模型组相比，FPB高、低剂量组均可显著改善I/R损伤小鼠学习和记忆能力(P＜0.01，P＜0.05)。见表1。

表1 FPB对I/R损伤小鼠学习记忆能力的影响(s)

表1 FPB对I/R损伤小鼠学习记忆能力的影响(s)

与假手术组比较：1)P＜0.01;与模型组比较：2)P＜0.05，3)P＜0.01，下表同

组别 n 学习正确次数 记忆正确次数10 0.65+0.16 0.69±0.17模型组 8 0.17±0.071) 0.37±0.151)低剂量FPB组 8 0.44±0.121)2) 0.51±0.081)2)高剂量FPB组 9 0.52±0.113) 0.64±0.153)假手术组

2.2 FPB对I/R损伤小鼠脑组织MPO活力及TNF-α、IL-6含量的影响

模型组小鼠脑组织中TNF-α和IL-6含量及MPO的活力均显著升高(P＜0.05)。与模型组小鼠比较，FPB高、低剂量组小鼠脑组织TNF-α和IL-6含量及MPO的活力明显降低(P＜0.05)。见表2。

表2 FPB对I/R损伤小鼠脑组织中TNF-α、IL-6、MPO的影响±s)

表2 FPB对I/R损伤小鼠脑组织中TNF-α、IL-6、MPO的影响±s)

组别 n TNF-α(ng/L)IL-6(pg/ml)MPO(U/g)10 282.32±28.34 120.28±22.26 0.64±0.08模型组 8 321.90±25.361)209.97±56.481) 0.85±0.151)低剂量FPB组 8 278.00±33.032)176.34±29.052) 0.71±0.102)高剂量FPB组 9 272.53±40.052)128.87±14.603) 0.68±0.092)假手术组

3 讨论

学习记忆功能障碍是缺血性脑血管疾病患者普遍的临床表现。本研究显示，脑I/R损伤的小鼠在Y型迷宫中回避电击的正确次数显著减少，记忆能力也明显下降。预先给予FPB的小鼠则表现出了较好的规避危险的能力，提示FPB可减轻脑I/R造成的损伤。脑I/R损伤的发生是多种因素及多种机制参与的复杂病理生理过程，其中炎症反应起着重要的作用。当脑缺血/再灌注时，可激活脑血管内皮细胞、血小板和免疫细胞释放大量的促炎性细胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8、血小板激活因子和补体活化产物等物质〔6〕。TNF-α、IL-6作为炎症反应及免疫应答的重要调节因子，参与I/R损伤过程，加重脑损伤〔7〕。MPO是中性粒细胞的活化标志物，可诱导炎症相关基因的表达，促进炎症效应细胞的增殖与活化〔8〕。本研究结果表明，小鼠I/R损伤后脑组织中TNF-α、IL-6含量显著升高，MPO活力亦明显提高，而预先给予FPB可降低脑组织中TNF-α、IL-6含量及MPO活力，提示FPB可抑制脑I/R后炎症反应。

黄酮类化合物具有广泛的药理活性，本研究证实翻白草总黄酮可抑制炎症反应，对脑I/R后学习记忆能力有一定保护作用，为其在脑血管疾病防治方面的应用提供了实验依据。

1 南京中医药大学.中药大辞典〔M〕.上海：上海科学技术出版社，2005：3820.

2 刘艳南，苏世文，朱延儒.翻白草抗菌活性成分的研究〔J〕.中草药，1984;15(7)：45.

3 朴丽花，洪 花，金 政，等.翻白草对四氧嘧啶性糖尿病大鼠的降糖作用及对胰岛的病理学影响〔J〕.时珍国医国药，2007;18(7)：1663-4.

4 孟令云，杨 玲，王佳祥，等.翻白草中黄酮类化合物的液相色谱分析〔J〕. 中草药，2005;36(3)：445-6.

5 孙海峰，杨 婷，阴旗俊，等.翻白草降血糖活性部位提取工艺的优化研究〔J〕. 中医药学报，2009;27(3)：49-51.

6 李春颖，曲 娴，李东盈.反复脑缺血再灌注对小鼠学习记忆和脑内氧化损伤的影响〔J〕.北华大学学报(自然科学版)，2009;10(4)：322-6.

7 刘秀平，许栋明，王 文，等.炎症反应影响脑缺血再灌注损伤的研究进展〔J〕.中国康复理论与实践，2009;15(11)：1041-3.

8 Wong ND，Gransar H，Narula J，et al.Myeloperoxidase，subclinical atherosclerosis，and cardiovascular disease events〔J〕.JACC Cardiovasc Imaging，2009;2(9)：1093-9.

R285

A

〕 1005-9202(2012)22-4965-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.052

泰安市大学生创新项目(No.2010D2040)

张 峰(1972-)，男，硕士，讲师，主要从事中药药理学研究。

刘文泊(1989-)，男，2008级临床药学专业本科生，主要从事药学研究。

〔2011-10-18收稿 2012-01-10修回〕

(编辑 曹梦园)