喉痛片质量标准分析与研究

邵燕虹

喉痛片收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第14册175页，由山豆根、乌梅、鹅不食草、甘草、儿茶、玄参、薄荷脑等组成的中药复方制剂，具有解毒消炎，凉喉生津之功效。用于咽喉、口、鼻腔红痛的治疗［1］。原标准只有简单的性状及片剂常规检查。本文采用薄层色谱法和高效液相法对喉痛片进行更好的质量监控。

1 仪器、试药与药品

岛津-20A高效液相色谱仪;SPD-M20A检测器;Diamonsil(钻石)C18(250 mm×4.6 mm×5 m)色谱柱;Sartorius-CPA225D，十万分之一电子天平;KQ-500DE型超声波清洗器;CMAG REPROSTARⅡ型号成像系统;硅胶G板(青岛海洋化工研究所);乙腈:色谱纯，Merck KGaA;水为超纯水;其余试剂均为分析纯;乌梅对照药材(中国药品生物制品检定所，批号:121208-200903)、苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110805-200306)。喉痛片及阴性对照(广州王老吉药业股份有限公司提供)。

2 实验方法与结果

2.1 乌梅的薄层色谱鉴别 取本品粉末1.0 g，加甲醇20 ml，超声处理30 min，滤过，蒸干，残渣加水20 ml使溶解，加乙醚提取2次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡2次，15 ml/次(浸泡约2 min)倾去石油醚，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取乌梅对照药材2.0 g，加甲醇20 ml，同法制成对照品药材溶液［2］。另按处方工艺制备缺乌梅的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》第一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-二氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸(20∶5∶8∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃加热至斑点显色清晰。日光下检视，供试品色谱中，在与乌梅对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照液在相应位置上无斑点。置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与乌梅对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照液在相应位置上无荧光斑点。结果见附图1～2。

图1 乌梅薄层色谱图(日光下)

图2 乌梅薄层色谱图(紫外光灯下)

2.2 含量测定

2.2.1 检测波长选择 岛津-20A高效液相色谱仪;SPDM20A检测器;，对苦参碱对照品溶液在190～800nm波长范围内进行光谱扫描，在205 nm处有吸收波长，结合《中国药典》(2010年版一部)“苦参”药材质量标准，选定205 nm为检测波长。结果见附图3～4。

图3 苦参碱光谱图

图4 喉痛片(缺山豆根)阴性光谱图

2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－0.02 mol/L磷酸二氢铵溶液(每1000 ml中加入十二烷基硫酸钠2 g，磷酸1 ml)(33∶67);检测波长;205 nm;进样量:10 μl;柱温:35℃。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000［3］。

2.2.3 溶液制备

2.2.3.1 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液，即得。

2.2.3.2 供试品溶液的制备 取喉痛片粉末1.0 g，精密量定，置50 ml量瓶中，加氨水2 ml，再加二氯甲烷－甲醇(40∶10)混合溶液40 ml，超声处理30 min，取出，放冷，用二氯甲烷－甲醇(40∶10)混合溶液定容至刻度。摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至5 ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.3.3 阴性对照品溶液的制备 另按处方工艺制备缺山豆根的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.4 专属性考察 按制定的色谱条件，将苦参碱对照品溶液、供试品溶液、缺山豆根的阴性对照溶液，进行液相色谱分析，结果阴性对照无干扰。结果见图5～7。

图5 山豆根对照品

图6 供试品溶液

图7 山豆根阴性对照溶液

2.2.5 线性关系考察 精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇配制成每 1 ml含苦参碱 6.2984、12.5968、25.1938、50.3875、100.7750、201.5500、403.1000 g 的溶液。分别吸取10 μl，进行液相色谱分析，计算回归方程为:Y=17299X+61133，R=0.9995.说明丹皮酚在6.2984～403.1000 g之间呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，进行色谱分析，测定苦参碱峰面积，并计算峰面积的RSD=1.05%。说明所建立方法的精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液，精密吸取10 μl，进行色谱分析，分别在 0、2、4、8、12、24 h 测定，并计算含量，得相对标准偏差，RSD=1.98%。说明制备的供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批号的样品6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，按制定色谱条件依法测定，并计算含量。RSD=1.88%，说明该方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的喉痛片6份，精密加入一定量的苦参碱对照品溶液，按制定的方法进行操作与分析，测定苦参碱的含量，计算加样回收率，回收率为99.63%，RSD=1.06%，该方法准确度较高，结果见表1。

表1 喉痛片加样回收率试验测定结果

2.2.10 样品测定 根据所制定的供试品提取方法及色谱条件对喉痛片三批进行分析与计算，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 苦参碱是该制剂中药材山豆根主要成分之一。曾采用薄层扫描法与高效液相色谱法进行含量测定，通过对不同批次的喉痛片样品的考察，结果高效液相色谱法对山豆根的含量，较薄层扫描法，操作简便，重现性好，故高效液相色谱法应是中药材及其制剂中苦参碱首选的分离分析方法。

3.2 增加乌梅的薄层色谱的定型鉴别，山豆根的高效液相定量含量测定，更好更全面的控制喉痛片的质量。

［1］中华人民共和国卫生部药品标准－中药成方制剂(第14册)，1997:175.

［2］国家药典委员会.中国药典(2010年版).一部.北京:化学工业出版社，2010，73，附录Ⅵ B，Ⅵ D.

［3］李树龙.TLC，HPLC法测定山豆根含量及研究，黑龙江医药，2009，22(4):446-447.