皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究

何光志

(1.贵阳中医学院，中国 贵阳 550002；2.大岭山畜牧兽医站，中国 东莞 523820；3.贵州省疾病预防控制中心，中国 贵阳 550003;4.贵阳学院， 中国 贵阳 550005)

皂角刺, 又称天丁、皂针等，为豆科植物皂荚(GleditsiasinensisLain.)的干燥棘刺，主要产于江苏、湖北，以及四川和贵州等地．皂角刺在中医临床中应用历史悠久，据《本草纲目》记载：“消肿脱毒，妒乳，风疠恶疮，排脓，杀虫”[1]．现代医学证实，皂角刺具有抗菌、抗病毒和抗癌等作用．皂角刺总黄酮是皂角刺的提取物．本研究通过提取皂角刺总黄酮，体外细胞培养肝癌HepG2细胞, 探讨皂角刺总黄酮对HepG2细胞细胞株的增殖和凋亡的影响, 从不同角度研究其抗肿瘤作用机制，旨在为深入开发利用皂角刺这一中药材提供依据．

1 主要试剂与仪器

人肝癌细胞株HepG2，购自中科院生物化学与细胞生物学研究所；MEM、DMEM、青霉素和链霉素，购自Gibco公司；96、6孔细胞培养板，购自Costar公司；胎牛血清，购自杭州四季青生物工程材料有限公司；Quick Apoptotic DNA ladder Detection kit，购自Biovision公司；流式细胞仪，购自美国Becton Dickson公司；琼脂糖，购自上海生工生物工程有限公司; DMSO，购自北京亚太精细化工公司产品；WST-1，Quick Apoptotic DNA ladder Detection Kit试剂盒，大连宝生物；Transwell小室，购自美国Corning公司；纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)和基底膜基质凝胶(Matrigel)，购自BD公司；倒置荧光显微镜，上海光学仪器厂；Model550型酶标仪，Bio-Rad公司产品；Transwell小室，美国Corning公司；流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC 试剂盒，购自美国BACKMAN COULTER 公司；WST-1，Amresco 科技公司产品．

2 方法

2.1 皂角刺总黄酮的提取

参照曹学锋等[2]方法进行提取．

2.2 细胞培养

采用MEM培养基(含10%灭活的胎牛血清、1.667 mkat/L青霉素和100 mg/L链霉素)培养人肝癌HepG2细胞培养；2种细胞株均置于37 ℃、5%的CO2培养箱中培养．