重组hcmvIL-10的表达纯化及免疫抑制活性研究①

曾 智 高 艳 冯晶晶 田可港 浮 苗 彭 颖 郑晓群

(温州医学院附属第二医院，温州325027)

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)是疱疹病毒科β属双股线性DNA病毒。发达国家人群HCMV的感染率为40% ～60%，而发展中国家几乎达到100%，且多在婴幼儿时期发生[1]。HCMV是胎儿宫内感染和围产期感染的重要病原，也是引起婴幼儿和免疫力低下个体的主要病原体之一。HCMV感染具有潜伏-激活的生物学特性，其侵入人体后可通过多种途径逃避宿主的免疫监视和防御功能，在体内潜伏或呈低度复制，从而长期或终身存在于宿主体内。

HCMV自身可编码多种蛋白，从多个水平干扰宿主的免疫应答，或调节病毒DNA的复制，有利于宿主细胞内潜伏。研究表明[2]，HCMV病毒基因组中存在与人类白细胞介素10(Interleukin-10，IL-10)序列同源性的区域，编码IL-10同源类似物，即人巨细胞病毒编码的IL-10同源类似物(hcmvIL-10)。hcmvIL-10与人白细胞介素10(hIL-10)有27%同源性，可与 IL-10 受体(IL-10R)相互作用[3，4]，具有 IL-10的许多重要功能:如抑制细胞因子的合成，干扰细胞表面MHC的表达和调节细胞介导的细胞毒性反应等[5]。因此，为了研究 hcmvIL-10在HCMV潜伏-激活感染中的作用机制及其与hIL-10的功能差异，我们表达纯化了hcmvIL-10和hIL-10重组蛋白，探讨并比较二者对单核细胞的免疫抑制活性及分化相关基因表达的差异，为进一步深入研究打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料 pMal-c2X-hcmvIL-10和pMal-c2X-hIL-10菌株由本实验室保存;THP-1细胞购自中国科学院上海细胞库;蛋白质分子量标准(低)、100 bp DNA Ladder Marker、PCR 试剂、RT-PCR试剂盒、QPCR试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司;功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY购自美国Super-Array公司(PAHS-034A);β-巯基乙醇(2-ME)购自美……