内皮素-1活化ROCK/SLUG诱导人卵巢癌细胞发生上皮向间充质转分化

张阿丽，张 弓，彭 晋，王全胜，马 欢，钟亚华，周福祥，谢丛华

(1.武汉大学中南医院放化疗科，武汉大学中南医院肿瘤生物学行为湖北省重点实验室，湖北省肿瘤医学临床研究中心，湖北武汉 430071;2.华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科，湖北武汉 430022)

卵巢癌是妇科恶性肿瘤的首要致死原因，2010年美国新报告卵巢癌患者21 880人，全年有13 850例卵巢癌患者死亡［1］。上皮细胞向间充质细胞转型(epithelial to mesenchymal transition，EMT)可使癌细胞获得迁移、侵袭和转移的能力，从而在肿瘤转移中有重要的作用。因为内皮素-1(endothelin-1，ET-1)及内皮素受体(ETAR)在卵巢癌原发灶和转移灶中高表达［2］，而且在肿瘤细胞中，ET-1/ETAR 自分泌通路通过诱导其纤维样和侵袭表型，从而促进肿瘤细胞EMT。ROCK为Rho GTPases的下游效应分子，可以调节细胞骨架的组装以及细胞黏附斑的形成，在EMT中起重要作用［3］。转录因子SLUG在卵巢癌细胞EMT中也起重要作用［4］。目前，ROCK与SLUG的关系，以及它们在ET-1诱导上皮卵巢癌细胞发生EMT中的作用还未见报道。本研究以人卵巢癌细胞SK-OV-3和CaOV3为研究对象，通过给予ET-1刺激或激活ROCK等，观察该细胞侵袭能力及EMT表型相关基因的改变以及转录因子SLUG的变化，探讨ROCK/SLUG通路在ET-1诱导上皮卵巢癌细胞EMT中的作用。

1 材料与方法

1.1 细胞与抗体 人卵巢癌细胞SK-OV-3，CaOV3购自武汉大学生物医学保藏中心，培养在含1% 青－链霉素和10%FBS的RPMI 1640(美国Invitro-gen公司)中。兔抗纤连蛋白(fibronectin，FN)抗体，鼠抗β-actin抗体和兔抗ROCK抗体(美国Santa Cruz公司)，鼠抗 E-cadherin抗体(美国 Zymed公司)。

1.2 细胞免疫荧光染色 培养在含10%FBS的RPMI 1640中的SK-OV-3和CaOV3(1×105/孔)生长在盖玻片上24 h，无血清……