青蒿琥酯诱导食管癌Eca109细胞凋亡

刘 亮，左 静，左连富*，郭建文

(河北医科大学第四医院1.肿瘤研究所流式细胞室，河北石家庄050011;2.肿瘤内科，河北石家庄050011)

食管癌是我国较常见的恶性肿瘤，尤其是河北省的磁县，食管癌发病率及死亡率较高。抗肿瘤药物较大的不良反应是导致化疗效果下降的主要原因之一，寻找高效低毒的抗肿瘤药物，是肿瘤学研究者长期从事的工作。中药治疗肿瘤已具有几千年的历史，具有低毒、价廉等优点。青蒿琥酯 (Artesunate，Art)化学名为二氢青蒿素-1，2-α-2琥珀酸单酯，是具有倍半萜结构的抗疟药青蒿素的衍生物之一，研究发现，青蒿琥酯除了具有抗疟作用以外还具有抗肿瘤活性［1－2］，但在食管癌中的研究较少。本实验主要研究青蒿琥酯诱导食管癌细胞凋亡的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系来源:人食管癌细胞系Eca109细胞为本实验室传代培养。

1.1.2 主要实验仪器及试剂:Epics-XLⅡ型流式细胞仪 (Beckman-Coulter公司);BCL-2抗体(克隆号:sc-7480)及BAX抗体(克隆号:sc-7382)(Santa Cruz公司);青蒿琥酯(批号:ZA070802)(桂林南药有限公司);胎牛血清(杭州四季青公司)。

1.2 方法

1.2.1 药物干预实验:取对数生长期的Eca109细胞以1×106/mL接种至细胞培养瓶中，待细胞贴壁后，加入不同浓度的青蒿琥酯，使终浓度分别达到10、20、40 mg/L，对照组使用0.9%氯化钠代替青蒿琥酯，作用24 h后，收集细胞，PBS液洗涤2次，部分细胞70%乙醇固定放入4℃冰箱保存用于流式细胞术检测，部分细胞用于Western blot检测。每组实验重复3次。

1.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期:调整每份样品的细胞数为1×106/100μL，加入50 mg/L PI染液1 mL，在4℃冰箱中染色30 min，上机检测DNA含量。……