不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞－巨噬细胞集落形成单位的影响

刘晋辉 何吉 陈舒 秦斐 王芳 徐罡 朱发明 吕杭军 严力行

造血干细胞移植是治疗血液系统恶性肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、遗传性疾病的有效手段。近年来脐血造血干细胞因其来源广泛、HLA配合程度要求低、患者移植后移植物抗宿主病发生率低等优点，已广泛应用于临床造血干细胞移植中。评价脐血造血干细胞质量的一个重要指标是集落培养效果［1］，但是目前国内脐血造血干细胞库所采用的各种培养体系在集落培养效果方面存在差异［2］。我们对比分析了脐血造血干细胞库常用的H4534和GF-H4434两种甲基纤维素培养基生成细胞集落的能力，以期为脐血造血干细胞培养体系选择提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 脐血来源

选择2009年1月至2011年1月足月分娩的565名产妇作为志愿者。在志愿者知情同意下，用三联采血袋从其脐静脉采集脐血。

1.2 主要仪器设备和试剂

二氧化碳培养箱(HEPA class 100，Thermo，美国)，倒置相差显微镜(TE2000-U，NIKON，日本)，台式离心机(MACH 1.6，SORVALL，美国)。

RPMI 1640培养液(Gibco®，美国)，淋巴细胞分离液(1.077 g/mL，上海华精生物高科技有限公司)，H4534甲基纤维素培养基(MethoCult®，加拿大)和GF-H4434甲基纤维素培养基(MethoCult®，加拿大)。GF-H4434系在H4534基础上添加促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)。

1.3 方法

1.3.1 标本制备

采用两步法获得浓缩的造血干细胞［3］。用3 mL RPMI 1640培养液洗涤转移袋中脐血干细胞，加至4 mL淋巴细胞分离液表面，以800 g离心20 min，吸取白膜层，用RPMI 1640培养液洗涤2次，调节细胞浓度至1×106/L备测。

1.3.2 集落培养

根据不同培养条件分为H4534组(n=251)和GF-H4434组(n=314)。H4534组采用H4534甲基纤维素培养基，该培养基含1.0%甲基纤维素、30%FBS、1% 牛血清蛋……