P21和Bcl－2在腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中的表达及意义

赵立江，陈福宝(.宁夏医科大学，宁夏 银川 750004;.宁夏医科大学总医院，宁夏 银川 750004)

腺性膀胱炎(Cystitis glandularis，CG)为膀胱黏膜增生、化生性病变。目前多数人认为，腺性膀胱炎是癌前病变，与膀胱上皮肿瘤关系密切。但是目前腺性膀胱炎预后及癌变的临床监测指标报道少见，是急需解决的问题。P21基因突变是促发正常膀胱黏膜细胞恶变的一条重要途径。Bcl－2是细胞凋亡的抑制基因，可延长细胞生存并增加分裂，与膀胱肿瘤的形成密切相关。笔者采用免疫组织化学的方法检测P21和Bcl－2在正常膀胱组织、腺性膀胱炎及膀胱移行细胞癌中的表达，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料:收集宁夏医科大学总医院2010年10月～2012年4月活检及手术切除的石蜡包埋正常膀胱组织、腺性膀胱炎及膀胱移行细胞癌标本161例;其中正常膀胱组织标本10例，腺性膀胱炎标本62例，膀胱移行细胞癌标本89例，其中低级别尿路上皮癌37例，高级别尿路上皮癌52例;所有病例术前均未经放疗、化疗及免疫治疗。试剂:鼠抗P21单克隆抗体(即用型)及鼠抗Bcl－2单克隆抗体(即用型)，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法:应用免疫组织化学二步法对各组石蜡包埋组织切片标本进行P21和Bcl－2表达产物进行检测。阴性对照切片用PBS替代第一抗体。分别由两名经验丰富的病理医师在不知临床和病理资料的情况下独立观察切片(至少5个具有代表性的视野，不少于1 000个细胞)，对免疫组化结果进行评估。阳性结果判断:胞浆或胞核出现黄色为阳性细胞。①在400倍光学显微镜下，通过摄像头采集免疫组化切片图像并输入图像分析系统，进行单位视场内阳性细胞及细胞总数计数。②每个病例随机选取5个不同视野，用鼠标点击法计数阳性细胞和细胞总数。免疫组化结果判断:阳性染色细胞数＜10%为(－);阳性染色细胞数10%～25%为(+);阳性染色细胞数25%～50%为(++);阳性染色细胞数≥50%为(+++)。凡达不到上述标准及显色强度与背景无明显差别者为阴性。

1.3 统计学处理:所有数据分析采用χ2检验等相关检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P21在正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌组织的表达:正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌组织中P21的阳性表达分别为0/10，18/62(12.9%)和40/89 (44.94%)，P21阳性表达依次递增，差异有统计学意义(P＜0.05)，详见表1。

膀胱移行细胞癌中低级别尿路上皮癌的 P21表达为59.46%，显著高于高级别尿路上皮癌组31.58%的表达，详见表2。

表1 正常膀胱组织、腺性膀胱炎、膀胱移行细胞癌中P21的表达(例)

表2 膀胱移行细胞癌中低级别尿路上皮癌及高级别尿路上皮癌P21的表达(例)

2.2 Bcl－2在正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌组织的表达:正常膀胱、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌组织中Bcl－2的阳性表达分别为1/10(10%)，42/62(67.74%)，45/89(50.56%)，组间差异有统计学意义，详见表3。膀胱移行细胞癌组中低级别尿路上皮癌与高级别尿路上皮癌组的Bcl－2的阳性表达无统计学差异，详见表4。

表3 正常膀胱组织、腺性膀胱炎、膀胱移行细胞癌中Bcl－2的表达(例)

表4 膀胱移行细胞癌中低级别尿路上皮癌及高级别尿路上皮癌Bcl－2的表达(例)

3 讨论

Ras基因是从人膀胱癌细胞株中克隆到的第1个人类癌基因［1］，其编码蛋白质分子为21KD，称为P21。P21蛋白与其他G蛋白具有同源性，有鸟苷酸结合的能力，并且有GTP酶的活性，定位于细胞膜内侧。目前相关研究认为，在外界信号作用下，P21结合GTP，信号系统便处于开放状态，使蛋白质变构而被效应器识别，进而产生生物学效应，导致细胞增生，随后P21蛋白发挥GTP酶活性，使GTP水解为GDP，又使信号系统关闭，当P21突变导致其GTP酶活性下降，使P21一直处于与GTP结合的状态，不断传导生长信号，造成细胞生长紊乱，导致肿瘤的发生。

本研究通过免疫组化方法检测正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中P21的表达发现，P21在他们间呈递增表达，并有统计学差异，提示腺性膀胱炎可能是正常膀胱组织恶变为膀胱癌的中间阶段，P21表达的腺性膀胱炎有潜在的恶变倾向。

进一步研究，笔者应用免疫组化方法在低级别尿路上皮癌与高级别尿路上皮癌中P21染色发现，低级别尿路上皮癌中P21表达显著高于高级别尿路上皮癌。本研究提示，P21的表达为肿瘤发生过程中的早期现象，Ras基因的活化主要是在肿瘤的早期阶段，所以P21阳性表达在早期较多，随肿瘤的发展，Ras基因逐渐失活。

Bcl－2基因其产物为Bcl－2蛋白，Bcl－2基因从正常位置的18q21处并置到14q32，可使细胞异常表达Bcl－2蛋白。Bcl－2蛋白的过度表达可导致DNA受损细胞继续生存，突变产物累积，促进肿瘤的发生发展。

文献报道，膀胱癌中有Bcl－2蛋白过度表达的现象，且与正常膀胱黏膜细胞中存在显著差异。倪少滨等通过在腺性膀胱炎与膀胱癌组织中Bcl－2的检测发现［2］，Bcl－2的阳性率表达依次下降，但无统计学差异。目前对Bcl－2在正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中的表达尚无明确报道。本研究通过免疫组化方法检测正常膀胱组织、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中P21的表达发现，多组间比较，Bcl－2在正常膀胱组织、腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌组织之间有统计学意义。Bcl－2在腺性膀胱炎标本中有42例阳性，阳性率为67.74%，说明其过度表达在腺性膀胱炎中就已存在。但是，在膀胱移行细胞癌中有45例Bcl－2表达呈阳性，阳性率50.56%，与腺性膀胱炎中Bcl－2的表达有统计学差异。其可能原因为:当病变尚处于活跃的炎性反应性增生、化生阶段或肿瘤前期病变时，Bcl－2即已参与其中发挥抑制细胞凋亡的作用。当肿瘤发生后，虽继续产生影响，其表达强度和表达率有所减弱，其作用地位也逐渐地为其他的癌基因所取代，如P21基因等，因此可以认为，Bcl－2基因主要参与了肿瘤的早期事件。

进一步研究，笔者应用免疫组化方法在低级别尿路上皮癌与高级别尿路上皮癌中Bcl－2染色发现，低级别尿路上皮癌中Bcl－2表达低于高级别尿路上皮癌，无统计学差异。

目前多认为腺性膀胱炎是一种癌前病变，与膀胱肿瘤密切相关。笔者认为，P21和Bcl－2可能在腺性膀胱炎发展成膀胱移行细胞癌中发挥了重要作用，其可作为腺性膀胱炎向膀胱癌转变的检测指标之一。若将这两种基因的联合检测应用于临床工作中，则可作为腺性膀胱炎癌变早期较有价值的参考指标。P21和Bcl－2阳性的腺性膀胱炎，临床上应积极治疗并密切随访。

［1］ 孟 彦，许纯孝.Ras癌基因与膀胱癌［J］.山东医药杂志，2003，43(18):60.

［2］ 倪少滨，陈起引，邓 索.p53和bcl－2在腺性膀胱炎及膀胱癌组织中的表达与意义［J］.2004，4:500.