miR-15a 和miR-16-1 在弥漫性大B 细胞淋巴瘤中的表达及意义*

徐 晓 欧阳卫泽 郑美蓉，2

(1 九江学院临床医学院/附属医院; 2 九江学院基础医学院 江西九江 332000)

弥漫性大B 细胞淋巴瘤(diffuse large B -cell lymphoma，DLBCL)是最常见的一类非霍奇金淋巴瘤，在临床特征、形态学表现、免疫表型和分子遗传学等方面具有异质性［1］。MicroRNA 是近来发现的一类调节基因表达的非编码RNA。成熟miRNA 大约19 -25nt (核苷酸)，由70 -100nt(核苷酸)pre-miRNA 剪切而来，成熟miRNA 通过和靶基因mRNA 碱基配对引导沉默复合体(RNA - induced silencing complex，RISC)降解mRNA 或阻碍其翻译，在转录后水平调控靶基因的表达［2］。miR -15a、miR -16 -1 属于MicroRNA的两个成员。2002年，Calin 等发现miR -15a和miR-16 -1 定位于人染色体13q14.3的区域内，而这一区域在50%的慢性淋巴细胞白血病(CLL)病人中缺失［2］。Cimmino 等研究发现miR-15a 和miR -16 -1 两者5’末端的前九个核苷酸与BCL2cDNA 第3287 至3279 之间的碱基互补。在慢性淋巴细胞白血病，miR-15a 和miR-16 -1都能直接与BCL2mRNA的3’UTR 作用，在转录后水平负向调控BCL -2的表达［3］。BCL -2 蛋白的表达与DLBCL的不良预后有关，miR -15a 和miR-16 -1 是否与DLBCL 中BCL-2 蛋白表达有关，现将笔者研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本

收集九江学院附属医院病理科2005 ～2010年DLBCL 石蜡标本30≥，随机选取反应性增生的淋巴结10≥作为对照。收集患者临床病理资料，所有组织标本均经10%的福尔马林固定，石蜡包埋。所有组织切片均由两名高级职称病理医师复审并确诊，按照2008年WHO 造血与淋巴组织肿瘤病理学标准进行形态学和免疫表型分型［1］。

1.2 石蜡组织中提取RNA 及RT-PCR

应用miRNeasy FFPE Kit (QIAGEN 公司)试剂盒提取石蜡组织中的总RNA。cDNA 合成反应体系:100mmol/L dNTPs 0.2μL，1.5μL 逆转录酶，逆转录Buffer1.5μL，RNA 酶抑制剂0.2μL，无RNA 酶水4.5μL，3μL 引物和5μLRNA 样本，扩增条件如下:16℃30min，42℃30min，85℃5min，将miR-15a 和miR -16 -1 逆转录为cDNA，-20℃保存。miR -15a 和miR -16 -1 逆转录引物序列、Real -time 引物序列和Taqman 探针序列见表1［4］。……