青心酮对兔动脉粥样硬化血管细胞黏附因子－1蛋白表达的影响

王 琳 刘同美 张代娟 刘江月

（潍坊医学院病理生理教研室，山东 潍坊261053）

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种多因素相互作用引起的一类血管慢性炎症性疾病［1］，其形成过程和发病机制至今尚未被完全阐明。活血化瘀中药成分青心酮（3，4－dihydroxy－acetophenone，3，4－DHAP）在临床用于冠心病、妊高征均获得较好的临床效果［2－3］。本实验旨在研究DHAP对AS病变中VCAM－1表达的影响，探讨DHAP对AS的防治机制。

1 材料与方法

1.1 动物模型与分组

18只新西兰大白兔，♂，（体重2.0～2.5kg，12周龄），常规饲料适应性喂养1周后，随机分为3组：常规饲料组、胆固醇饲料组和DHAP组，每组6只。胆固醇饲料组给予高脂饮食（配方为：83.5%常规饲料，8%猪大油，7.5%蛋黄粉，1%胆固醇），青心酮组除高脂饮食外，给予DHAP（10mg／kg），常规饲料组做对照组。喂养至12周末处死。

1.2 血脂检测和体重测量

0周和12周末耳缘静脉取血，离心后取血清，应用全自动生化分析仪测定TC、TG、LDL。抽血前测量体重。

1.3 组织形态学观察

12周末处死动物，迅速分离出主动脉，选取主动脉约1.5cm，10%中性福尔马林溶液固定24h，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片机上制成5μm厚的连续切片，每组50张，每间隔6张取1张，行HE染色，光镜下观察组织学形态。

1.4 免疫组织化学分析

采用ABC法进行组织染色，一抗采用抗兔VCAM－1多克隆抗体（购于武汉博士德生物科技有限公司）。DAB显色，苏木素复染，封片后在显微镜下观察。应用Motic Images Advenced 3.2图像分析软件计算阳性细胞百分比，求平均值。

1.5 Western blot法检测VCAM－1蛋白表达

取主动脉约1cm加入裂解液，冰浴状态下提取蛋白，12%SDS－PAGE凝胶电泳分离蛋白，转膜，5%脱脂奶粉封闭60min，一抗4℃过夜，TBST冲洗5min，共3次，碱性磷酸酶标记二抗37℃60min，TBST冲洗3次，每次5min，ECL法显色，图像分析。……