汉防己甲素诱导人胃癌BGC-823细胞自噬和凋亡的作用及机制

方 悦，曹 渊，秦 蓉，沈慧玲，许文林

(江苏大学附属第一人民医院中心实验室，江苏镇江212001)

汉防己甲素(TET)，又名粉防己碱，是一种双苄基异喹啉类生物碱。已有研究证实TET不仅是天然的非选择性钙通道阻滞剂，也是钙调蛋白拮抗剂，具有直接抑制肿瘤细胞生长，逆转肿瘤细胞的多药耐药以及放疗增敏等多种作用［1］，还诱导肿瘤细胞发生凋亡和自噬［2］。细胞凋亡和自噬性细胞死亡分别被称为I型和Ⅱ型程序性细胞死亡，在某些细胞环境和(或)刺激物的作用下，二者相互影响［3］。2012年12月～2013年3月，我们观察了汉防已甲素诱导胃癌BGC-823细胞自噬和凋亡的作用，旨在进一步探讨两者发生以及相互关联的分子机制，为寻找抗癌药物治疗的新靶点提供依据。

1 材料与方法

1．1 材料 人胃癌BGC-823细胞由本实验室保存;含10%胎牛血清的DMEM培养基购自Gbico公司;汉防己甲素注射液购自江西银涛药业有限公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)购于Sigma公司;MDC单丹磺酰戊二胺(MDC)购自美国Sigma公司;3-MA购自美国 Calbiochem公司;蛋白提取试剂盒购自TaKaRa公司;HRP标记的羊抗鼠、兔二抗购自北京康为世纪生物公司;鼠抗人β-actin抗体，兔抗人Beclin1、Bcl-2、LC3抗体均购自Abcam公司;其他无机试剂均为分析纯。

1．2 实验方法

1．2．1 细胞培养 人胃癌细胞株BGC-823用体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液培养，置于37℃、5%CO2和饱和湿度的条件下，每2～3 d胰酶消化传代1次。实验均在细胞处于对数生长期进行。

1．2．2 TET对BGC-823细胞增殖的抑制作用的观察 采用细胞增殖抑制试验(MTT试验法)。取对数生长期的BGC-823细胞接种于96孔板中，每孔1×104个，培养24 h 后，分别加入0(对照组)、6．0、8．0、10．0 、12．0 、15．0 和20．0 μg/mL 的 TET，以仅加培养液孔为调零孔，每组设置3个复孔。……