COX-2和VEGF在食管鳞状细胞癌原发灶与复发转移灶表达及意义

张巍巍*

（河南省新乡市中心医院肿瘤放射治疗科，河南 新乡 453000）

COX-2和VEGF在食管鳞状细胞癌原发灶与复发转移灶表达及意义

张巍巍*

（河南省新乡市中心医院肿瘤放射治疗科，河南 新乡 453000）

目的 探讨食管癌原发灶与复发转移灶间 COX-2 和 VEGF 表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测 47 例乳腺癌患者的原发灶和复发转移灶中 COX-2 和 VEGF 的表达情况及其相关性。结果 COX-2 和 VEGF 在原发灶和复发转移灶的阳性表达率分别为82.9%、61.7% 和 87.2%、68.1%，且 COX-2 与 VEGF 表达在原发灶和复发转移灶中均有相关性。COX-2 和 VEGF 在原发灶和复发转移灶中发生变化的比例分别为 8.5% 和 10.6%。结论 COX-2 和 VEGF 在食管癌的发生发展中可能起到不同作用，在肿瘤进展的不同阶段其表达存在明显差异。

食管癌；COX-2；VEGF

食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，2008年全世界新增发病48万，病死人数达40万[1]。我国为其高发区之一，严重威胁着我国人民群众的生命健康，复发转移仍是治疗失败的主要原因[2]。COX-2和VEGF均为肿瘤血管形成中的重要调节因子，在肿瘤的复发转移中起着重要作用。因此我们选择上述两个蛋白，检测其在食管癌原发灶及复发转移灶之间的表达，分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 资料收集

2008年1月1日至2011年12月31日新乡市中心医院经病理组织学确诊的47例食管癌癌组织及其转移灶标本。其中男性26例，女性21例；年龄34～84岁，中位年龄58岁；病理类型均为鳞状细胞癌；其中胸腔复发15例，锁骨上淋巴结转移17例，肺转移5例，脑转移2例，骨转移5例，腹腔转移3例。

1.2 主要试剂

COX-2和VEGF受体抗体均购自福州迈新生物技术开发有限公司，EDTA缓冲液、DAB、Maxvision、二抗等试剂也购自福州迈新生物科技有限公司，二甲苯、乙醇、苏木精等其他试剂购于市售。

1.3 免疫组化检测

所有标本组织标本均在手术后30min后放入中性福尔马林固定液中固定，经脱水、浸蜡等常规步骤后石蜡包埋。进行4μm厚连续切片，二甲苯脱蜡后，常规梯度乙醇脱苯入水，3%过氧化氢处理30min，PBS充分洗涤后置入柠檬酸缓冲液，高压锅进行抗原热修复，自然冷却至室温，滴加COX-2和VEGF抗体，放入湿盒中4℃冰箱孵育过夜，PBS充分洗涤后滴加生物素标记二抗，室温孵育60min，PBS充分洗涤后DAB显色，蒸馏水冲洗，苏木精复染，然后脱水、透明、中性树脂封片。用已知的阳性切片作阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。

1.4 COX-2和VEGF结果判断

根据细胞着色的情况对每张切片进行半定量评价，参照文献[3]方法，首先将切片色强度分为：0分阴性，1分弱阳性（染色强度为淡黄或浅棕色），2分强阳性（染色强度为黄或棕色）；然后根据染色强度部分所占比例计为为0分：0%～4%；1分：5%～24%；2分：25%～49%；3分：50%～74%；4分：75%～100%。两者乘积后各个部分相加作为每一张切片的最后计分。结果判定由三位资深病理学医师单独进行，取两者平均值。

1.5 统计学分析

采用SPSS15.0统计软件进行处理，采用卡方检验与Spearman等级相关检验进行结果分析。P＜0.05为差异有显著性，具有统计学意义。

2 结 果

2.1 COX-2和VEGF在原发灶及复发转移灶间的表达

COX-2在食管癌原发灶与复发转移灶的阳性率分别为82.9%和87.2%，差异有统计学意义（P＜0.05）；VEGF在食管癌原发灶与复发转移灶的阳性率分别为61.7%和68.1%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 COX-2及VEGF在食管癌原发灶及复发转移灶表达［n(%)］

2.2 COX-2和VEGF表达的相关性

在食管癌原发灶中，COX-2与VEGF共阳性7例，共阴性3例，两者之间有相关性（P＜0.05）；在食管癌复发转移灶中，COX-2与VEGF共阳性9例，共阴性2例，两者之间有相关性（P＜0.05）。

2.3 COX-2和VEGF在原发灶与复发转移灶间的表达变化

在47例食管癌癌患者中，COX-2的表达由阳性转为阴性1例，阴性转为阳性3例，共4例发生COX-2表达的变化，占8.5%；VEFG的表达由阳性转为阴性1例，阴性转为阳性4例，共例发生VEGF表达的变化，占10.6%。

3 讨 论

食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，我国为其高发区之一，且食管癌患者就诊时大多属于晚期，严重威胁着我国人民群众的生命健康。随着对食管癌研究的深入，食管癌根治性切除术有了很大的进步。但由于淋巴结清除的局限性和隐匿微小转移的存在，术后复发转移仍是治疗失败的主要原因[2]。

人类COX-2基因定位于1号染色体的1q25，全长8.3kb，由10个外显子和9个内含子构成，编码604个氨基酸残基组成的多肽。COX-2是诱生型花生四烯酸的环氧酶代谢途径中的限速酶，可催化花生四烯酸转化为前列腺素。在正常状态下，COX-2在各种因素（如细胞因子、缺氧、内毒素、高脂饮食、致癌剂、癌基因、病毒癌基因产物以及紫外线等）的刺激下增加表达。现在的研究发现：COX-2可通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进血管形成、抑制免疫功能等机制，参与肿瘤的发生和发展。体内外食管癌的研究中表明，COX-2在食管癌细胞的增殖及癌变中起着重要作用[4,5]。人VEGF基因定位于染色体6p21，由8个外显子和7个内含子组成，全长14kb。由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型，编码产物为34-45kD的同源二聚体糖蛋白。VEGF经过转录水平的剪切，可产生5种异构体，根据氨基酸的长短依次命名为VEGFl2l，VEGFl45，VEGFl65，VEGFl89和VEG206，其中VEGF121、VEGF165和VEGF189在人类表达。VEGF是肿瘤组织中最重要的促血管生长因子，它参与肿瘤细胞的生长增殖、分化及转移等过程。Liu等的研究表明：VEGF-C在食管癌组织中的表达明显高于癌旁组织[6]；VEGF-C和VEGFR-D在食管癌中高表达可以促进肿瘤的转移[6,7]。本研究发现，食管癌原发灶及其复发转移灶组织中COX-2、VEGF的表达均高表达，且COX-2和VEGF在食管癌原发灶及其复发转移灶组织中的表达差异有显著意义，与国内外众多报道相一致，且表明COX-2和VEGF在食管癌的复发转移中起着重要作用。此外，COX-2和VEGF在食管癌原发灶与复发转移灶间存在变化，变化率分别为8.5%和10.6%，表明COX-2和VEGF在食管癌的演进过程可能发挥着重要作用。

此外，我们的研究还发现，COX-2与VEGF在食管癌原发灶及其复发转移灶中的表达存在相关性，表明COX-2可能通过某种机制上调了VEGF的表达，从而促进肿瘤的血管形成，加速其发展转移。YEON等的研究发现，VEGF- C在食管鳞状细胞癌中的表达与COX-2的表达密切相关，且VEGF-C与原发肿瘤的浸润深度，肿瘤分期及淋巴结转移相关[8]。Su等在肺腺癌的研究中发现，COX-2可上调VEGF-C的表达，进而促进淋巴管生成和淋巴结转移[9]。

总之，COX-2和VEGF在食管癌原发灶及其复发转移灶中呈高表达状态，且两者之间存在有相关性。COX-2和VEGF均为食管癌发生发展中的重要因子，可能在不同的阶段存在差异性表达，发挥不同的作用。

[1]Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

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[3]于钟,袁宇红,詹俊,等.食管癌中COX-2表达与其临床病理特征及预后的关系[J].中国病理生理杂志,2006,22(11):2212-2217.

[4]Zhang L,Tu J, Yu ZL,et al.Effects of the inhibition of cyclooxygenase-2 on human esophageal cancer cells: inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis[J].Pathol Oncol Res, 2010,16(1):39-45.

[5]Zhi H,Wang L,Zhang J,et al.Significance of COX-2 expression in human esophageal squamous cell carcinoma[J].Carcinogenesis, 2006,27(6):1214-1221.

[6]Liu P,Zhou J,Zhu H,et al.VEGF-C promotes the development of esophageal cancer via regulating CNTN-1 expression[J].Cytokine, 2011,55(1):8-17.

[7]Kozlowski M,Naumnik W,Niklinski J,et al.Vascular endothelial growth factor C and D expression correlates with lymph node metastasis and poor prognosis in patients with resected esophageal cancer[J].Neoplasma,2011,58(4):311-319.

[8]Byeon JS,Jung HY,Lee YJ,et al.Clinicopathological significance of vascular endothelial growth factor-C and cyclooxygenase-2 in esophageal squamous cell carcinoma[J].J Gastroenterol Hepatol, 2004,19(6):648-654.

[9]Su JL,Shih JY,Yen ML,et a1.Cyclooxygenase-2 induces EP1-and HER-2/N eu-dependent vascular endothelial growth factor-C up-regulation:a novel mechanism of lymphangiogenesis in lung adenocarcinoma [J].Cancer Res,2004,64(2):554-564.

The Expression and the Significance of COX-2 and VEGF in the Primary and Recurrent Focuses of Esophagus Cancer

ZHANG Wei-wei
(Department of Cancer Radiotherapy, Xinxiang Center Hospital, Xinxiang 453000, China)

ObjectiveTo investigate expressions of COX-2 and VEGF in the primary and recurrent focuses of esophagus cancer patients and their clinical significance.Methods47 cases of esophagus cancer patients were analysised on the expressions and the correlation between COX-2 and VEGF in the primary and recurrent focuses of esophagus cancer by immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of COX-2 and VEGF were 82.9%, 61.7% in the primary esophagus cancer, and 87.2%, 68.1% in its recurrent focuses. COX-2 was related to VEGF in primary esophagus cancer and its recurrent focuses. The proportion of COX-2 and VEGF’s changing between the primary and recurrent esophagus cancer was 8.5% and 10.6% respectively.ConclusionCOX-2 and VEGF may act different effects in the development and progression of esophagus cancer, and their expressions are obviously different.

Esophagus cancer; COX-2; VEGF

R735.1

：B

：1671-8194（2013）04-0007-02

*通讯作者：E-mail：zww3654@126.com