兔骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定

刘 康，白亦光，陈 竹，韩小伟，杨泽龙，赵 明，宋桂芹，冯 刚

(1.川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所，四川南充 637000;2.川北医学院医学生物学教研室，四川南充 637007)

骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs)是一类来源于骨髓组织的具有强大增殖能力和多向分化潜能的干细胞［1］，具有向中胚层组织及神经外胚层组织分化的能力，在不同的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞等。骨髓间充质干细胞因其来源广、容易获取、无医学伦理学争议等优势，被认为是目前骨组织工程最为理想的种子细胞来源［2-3］。本研究对BMSCs的原代培养技术进行探讨，旨在摸索出一种更为简便有效的获取更高纯度和更多数量BMSCs的培养方法，同时观察BMSCs在体外环境培养下的生物学特性，从而解决骨组织工程研究中种子细胞来源的问题。

1 材料与方法

1.1 实验动物

出生2～3周的新西兰兔5只，雌雄不限，质量0.4～0.6 kg，由川北医学院实验动物中心提供。

1.2 试剂及仪器

DMEM培养液、胎牛血清购自Hyelone公司。PercoⅡ分离液购自博士德生物公司。噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自GIBCO公司。β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素c、胰岛素、番红、快绿、素木精等购自Sigma公司、DAB试剂盒购自碧云天公司。CO2培养箱、高速离心机购自Thermo公司。倒置相差显微镜购自NIKON公司。

1.3 方法

1.3.1 兔BMSCs的分离与培养 取1月龄新西兰大白兔(雌雄不限)，耳缘静脉注射空气处死。75%酒精浸泡消毒15～20 min后无菌操作下切开后肢皮肤、肌肉，去尽附着在骨上的肌肉、筋膜等软组织，分离出股骨和胫骨。……