MicroRNA－144在结肠癌中的表达水平及临床意义

张广钰，钟 漓，田小林，戴 凌，朱袭嘉，蒋志庆

（桂林医学院附属医院胃肠外科，广西 桂林 541001）

结肠癌是临床上常见的消化道恶性肿瘤，其发生、发展是多基因相关、多步骤的，寻找结肠癌发生、发展的诱导和促进基因，为结肠癌的诊断、治疗及其预后提供理论支持［1］。成为关注热点的microRNA作为一种非编码小分子RNA，具有广泛调节基因表达的功能，参与细胞增殖、分化、凋亡等多种重要细胞活动的调控［2］。近年来，研究发现microRNA具有癌基因和抑癌基因的作用，从而参与肿瘤的发生、发展［3－4］。本文通过逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（real－time reverse transcription－polymerase chain reaction，RT－qPCR）检测38例结肠癌中microRNA－144的表达水平，探讨其与结肠癌及其临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 桂林医学院2011年6月至2012年4月实施手术治疗的结肠癌患者38例，其中，男21例，女17例，患者中位年龄59岁，术前未行放、化疗等治疗，组织病理类型的判断标准参照WHO病理分期标准。每例标本留取肿瘤组织及对应7cm以上的癌旁正常结肠黏膜组织，每例都经病理切片检查证实，离体后5min内置于液氮中保存。Trizol试剂购自美国Invitrogen公司；逆转录酶、RNA酶抑制剂、Oligo dT、dNTPs、SYBR Mastermix等购自Takara公司；引物由上海Invitrogen生物技术有限公司合成。

1.2 RNA提取 取液氮保存的结肠癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织标本，在液氮中碾碎至粉末，加1mL Trizol裂解10 min收集上清液于EP管中，加氯仿200μL充分混匀，12 000 r／min离心15min，取上清200μL转移到新的去RNA酶的EP管中，加等量异丙醇颠倒混匀放置10min，12 000r／min离心10min，弃上清液加1mL 70%的乙醇颠倒混匀，12 000r／min离心10min，弃去乙醇，干燥，用DEPC处理过的蒸馏水溶解。……