嘛呢骨痹胶囊对骨质疏松大鼠骨代谢指标的影响*

王海东，金芳梅，王淑萍

(1.甘肃省中医药研究院，甘肃兰州730050;2.甘肃省中医院，甘肃兰州730050;3.甘肃中医学院，甘肃 兰州730000)

骨质疏松(osteoporosis，OP)是一种全身代谢性骨骼疾病，以骨量减少、骨组织微结构破坏为特征，表现为骨板变薄、多孔，骨小梁变细、断裂、稀少，骨显微结构的完整性受损、连接性降低，导致骨强度降低，骨脆性增加，极易发生骨折［1］。目前，全世界约有2亿人患骨质疏松症，其社会发病率已跃居世界各种常见病的第7位，被称为悄无声息的流行病。嘛呢骨痹胶囊来源于藏区民间治疗颈肩腰腿痛的验方，方中中、藏药结合，功效补肾温阳、活血壮骨。前期的药效学实验研究显示:该药可使大鼠软骨膜细胞、软骨细胞增生，且细胞体变大，骨小梁明显增宽，显示该药可使大鼠骨化作用增强［2］。本实验旨在探讨嘛呢骨痹胶囊对骨质疏松大鼠血清Ca、P水平，尿脱氧吡啶酚(deoxypyridinoline，DPD)和尿肌酐(creatinine，Cr)比值(DPD/Cr)的影响，研究嘛呢骨痹胶囊增治疗骨质疏松的作用及机制，为该药的临床运用提供理论依据，同时丰富中医肾主骨的理论。

1 材料与方法

1.1 动物

SPF级SD雌性大鼠72只，体质量(200±20)g，由甘肃中医学院科研实验动物中心提供，合格证号:SCXK(甘)2010－0001。

1.2 药品、试剂与仪器

嘛呢骨痹胶囊，由中药补骨脂、怀牛膝、杜仲、续断、乌梢蛇及藏药巴罗、休布、水柏枝等药物组成，批号为甘卫普制准字(98)332－14号，由甘肃中医药研究院制剂室提供;结合雌激素，0.625 mg/片，爱尔兰惠氏药厂产品，由江苏惠氏制药有限公司分包装，进口药品注册证号为BH20050498，分包装批准文号为国药准字J 20050120;戊巴比妥钠，上海化学试剂公司提供，批号F20091924。钙测定试剂盒(30T，批号为 20110627，20110706，20110708)，无机磷测定试剂盒(100T/96样，批号为20110627)，血、尿Cr测定试剂盒(100T/96样，批号20110706)，均由南京建成生物工程研究所提供;脱氧吡啶酚酶联免疫检测试剂盒(96T)，美国 RD公司产品，批号E11070609。BP211D型电子天平，瑞士Sartorius公司产品;UV－2401PC型紫外可见分光光度计，日本岛津公司产品;DZW－4型恒温水浴锅，金坛市恒丰仪器厂产品;PLCO型台式低温高速离心机，德国Heraeus公司产品。

1.3 模型的建立与分组

将72只大鼠按体质量编号后以随机数字表法抽取12只为假手术组(手术切除卵巢周围脂肪组织)，其余60只为手术组(切除双侧卵巢，使大鼠骨质疏松模型形成)。将造模成功的60只大鼠随机分为结合雌激素组、模型对照组和嘛呢骨痹胶囊低、中、高剂量组5组。大鼠手术后7 d开始灌胃治疗。嘛呢骨痹胶囊低、中、高剂量组每天分别以0.337 5，0.675 0，1.350 0 mg/g体质量灌胃给药;结合雌激素组每天以0.01 μg/g体质量灌胃给药，假手术组与模型对照组给予等量生理盐水，连续12周。每周称体质量1次，重新计算给药量。灌胃治疗12周后，密切观察动物的精神状态、毛色、进食、体质量变化，以及伤口有无感染迹象。

1.4 检测指标

标本采集:最后1次灌胃治疗后，所有实验大鼠均禁食不禁水24 h，置代谢笼中，收集24 h尿液并置－20℃冰箱中保存，集中检验。尿液收集，称量大鼠体质量;以30 g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(按100 g体质量0.15 mL给药);股动脉取血并断头处死大鼠，将血液在室温下静置1～2 h，使其充分凝固，以1500 r/min离心30 min，吸取上部清亮的血清于－20℃冰箱内保存以检测血Ca、血P水平。血Ca、血P、尿Cr水平按试剂盒说明书使用紫外分光光度仪测定;尿DPD按照大鼠Elisa－脱氧吡啶酚试剂盒说明书操作后，使用酶标仪检测。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计分析软件处理。计量资料数据以均数()±标准差(s)表示，组间比较采用单因素方差分析及t检验。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结果

与模型对照组对比，嘛呢骨痹胶囊高剂量组血Ca水平升高，尿DPD/Cr比值降低，差别有统计学意义(P＜0.01);嘛呢骨痹中、低剂量组Ca水平升高，但差别无统计学意义(P＞0.05);嘛呢骨痹胶囊低、中、高剂量可升高去卵巢大鼠的血磷水平，但差别无统计学意义(P＞0.05)。与结合雌激素组对比，嘛呢骨痹胶囊高、中剂量组血Ca、血和尿DPD/Cr比值差别均无统计学意义(P＞0.05)。见表1。结果提示:嘛呢骨痹胶囊通过抑制骨吸收可有效抑制骨质疏松症骨量的丢失，其治疗效果与结合雌激素相当，且治疗效果与剂量相关，有效剂量为中等剂量以上。

表1 各组大鼠血Ca、血P水平及尿DPD/Cr比值对比 ±s

表1 各组大鼠血Ca、血P水平及尿DPD/Cr比值对比 ±s

注:与假手术组对比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与模型对照组对比，#P＜0.05，##P＜0.01;与结合雌激素组对比，△ P＜0.05，△△ P＜0.01。

组 别 动物数 血Ca/mmol·L－1 血P/mmol·L－1DPD/Cr假手术组12 2.49±0.36 2.24±0.34 4.39±1.00模型对照组 11 2.14±0.50＊△ 1.82±0.40＊＊△△ 8.22±2.07＊＊△△结合雌激素组 11 2.50±0.39# 2.10±0.28*## 4.37±1.42##嘛呢骨痹胶囊高剂量组 11 2.59±0.27## 2.05±0.25 3.72±1.10##嘛呢骨痹胶囊中剂量组 12 2.41±0.41 1.90±0.31＊＊ 5.64±1.59##嘛呢骨痹胶囊低剂量组 12 2.34±0.45 1.76±0.25＊＊△ 6.80±2.77＊＊△△

3 讨论

骨的强度由骨吸收和骨形成的动态平衡决定，骨吸收增加或骨形成减少都将打破这个平衡，导致骨质疏松。在骨代谢指标中，骨吸收指标较骨生成指标更为准确和灵敏，对骨质疏松的诊断显得更有意义［3－4］。骨是人体中 Ca、P的最大储库，通过成骨与溶骨作用不断与细胞外液进行钙磷交换，以维持血Ca和血P的平衡。体内P 85%存在于骨中，其主要作用是促进骨基质的合成和骨矿沉积，血中Ca、P含量反应骨吸收，影响骨吸收速率，血中Ca、P的稳定是骨生长和矿化的必要条件。近年来，尿吡啶酚(PYD)和DPD的测定被认为是目前反映骨吸收最敏感且特异性很强的指标。前者广泛分布于骨、软骨、牙齿、肌腱、韧带和主动脉等成熟的胶原纤维中;后者是骨的特异性标志物，仅在骨骼Ⅰ型胶原中有相当量的存在，破骨细胞活动时作为Ⅰ型胶原纤维降解产物，以游离或肽结合形式释放入血，从尿中排出，不受饮食影响，具有骨特异性［5－6］。

中医理论认为:骨质疏松病因主要责之以肾虚，并与脾虚、气血生化不足存在密切相关，肝虚血瘀亦是骨质疏松发生、发展的促进因素。肾虚是骨质疏松发病的关键，而在肾虚的表现中，肾阳虚尤为显著。肾阳为全身之元阳，对机体脏腑、组织起温煦作用，维持脏腑、组织发挥正常生理功能。肾阳的盛衰关系着骨骼的生长发育，肾阳亏虚，则筋骨失去正常温煦，筋枯髓减而致骨痿;肾阳虚衰可使推动、激活功能减弱，导致脏腑、经络等组织器官的生理活动减弱;肾阳虚衰日久，气化失职，血液运行不利，甚则寒凝血瘀，脉道拘急，造成瘀血阻滞，经脉不畅;骨骼及其周围组织因瘀血阻滞而得不到濡养，则发为骨质疏松。中医学自古就有“久病入络”“因虚致瘀”的说法。嘛呢骨痹胶囊组方中补骨脂、怀牛膝为君药，温补肾阳、强筋壮骨;杜仲、续断为臣药，助君药补肾壮骨，舒筋活络;佐以乌梢蛇疏通经络，木香行气活血，藏药巴罗、休布活血通络;使以水柏枝宣透内湿，以消关节痹痛。全方组方严谨，诸药相伍，通达内外，标本互应，使温阳补肾而不燥，活血通络而不过，既补肾温阳，又活血通络壮骨，使气血和、精髓充，骨骼得到充养而刚强。

本实验研究显示:在血Ca方面，嘛呢骨痹胶囊能明显升高去卵巢大鼠的血Ca浓度，并能使去卵巢大鼠的血Ca浓度维持甚至高于正常水平，其中以嘛呢骨痹胶囊高剂量组作用最明显，甚至优于结合雌激素;在血P方面，嘛呢骨痹胶囊能明显升高去卵巢大鼠的血磷水平，但效果弱于结合雌激素;在尿DPD/Cr方面，嘛呢骨痹胶囊能降低去卵巢大鼠尿DPD/Cr，且有明显的量效关系，并有优于结合雌激素的趋势。综合分析表明:嘛呢骨痹胶囊能升高血Ca、血P水平，降低尿DPD/Cr。通过降低骨吸收来预防OP，可能为肾主骨作用机制之一。

［1］肖建德，阎德文，王大平，等.实用骨质疏松学［M］.北京:科学出版社，2004.

［2］王海东，李长天.嘛呢骨痹液对实验性大鼠创伤性骨痹作用的研究［J］.甘肃中医学院学报，2002，19(3):5 －7.

［3］肖恩.骨质疏松骨代谢生化指标的研究进展［J］.中国骨质疏松杂志，2008，14(3):212 －214.

［4］Prestwood KW，Thomprson DL，Kenny AM，et a1.Low dose estrogen and calcium have an additive effect on bone resorption in older women［J］.J Clin Endocrinol Metab，1999，84(1):179－183.

［5］Eyre DR，Dickson IR，Van Ness K，et al.Collagen cross－linking in humanbone and articular cartilage.Age－related changes in the content of maturehydroxypyridinium residues［J］.Biochem J，1988，252(2):459 －500.

［6］Delmas P.Clinical usefulness of biochemical marker of bone remodelingin osteoporosis［J］.Rew Prat，1995，45(9):1102.