朱海娟,王金保
前期研究证实神经病理性疼痛大鼠脊髓背角发生补体异常激活,且此处高表达的补体蛋白在动物模型痛觉过敏的形成和发展中发挥重要作用[1-3]。为了探索CD55蛋白作为重要的补体调节蛋白,在神经病理性疼痛(NPP)的发病过程中是否发挥作用,本研究制作NPP大鼠慢性坐骨神经缩窄损伤模型(CCI)、保留性脊神经损伤模型(SNI),测定大鼠脊髓中CD55蛋白表达情况,现报告如下。
1.1 实验动物及分组 60只健康清洁级SD大鼠(河北医科大学动物实验中心提供,动物合格证号:冀医动管字703058号),雄性,体重200~250 g。随机分为假手术组、CCI组、SNI组3组,每组20只。室温(20±2)℃,严格12 h明暗交替光照,给予充足的水源和饲料。适应环境7 d后进行实验,所有实验均在白天进行,大鼠的使用和喂养严格遵照河北医科大学伦理委员会和动物保护协会所规定的有关条款执行。
1.2 主要仪器和试剂 仪器:RTY-1型热痛刺激仪(第四军医大学生理教研室研制);BME-403型Von frey机械刺激仪(中国医学科学院生物工程研究所提供);BB16uv型CO2恒温培养箱(德国Heraeus公司生产);恒温摇床(重庆医用器材厂生产);Gel Doc 2000凝胶成像分析系统(美国Bio-Rad公司生产)。试剂:兔抗大鼠CD55多克隆抗体,批号:CD55(H-319):sc-9156,美国Santa Cruz公司生产;辣根酶标记的山羊抗兔IgG(H+L)亲和纯化二抗,购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 模型的制作 制作大鼠CCI和SNI模型:①CCI模型:大鼠俯卧位捆绑,从后肢上部切开皮肤,分离肌肉,暴露坐骨神经主干,使用羊肠线环绕坐骨神经主干并单结固定,羊肠线应能够在坐骨神经主干上滑动。……