禽呼肠病毒S1733株σNS 单克隆抗体的制备及其特性鉴定

谢志勤，谢芝勋，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢丽基，范 晴，罗思思

（广西壮族自治区兽医研究所 广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001）

鸡关节炎是由禽呼肠病毒（Avian reovirus，ARV）引起的危害商品雏鸡的一种病毒病，随着养鸡业的发展，该病的发生也越来越来常见。由禽呼肠病毒引起的临床症状主要为雏鸡关节炎、腱鞘炎，严重时出现鸡关节肿大，站立不稳，从而导致吸收障碍，抵抗力下降，很容易继发其他病原的感染而导致死亡，造成很大的经济损失［1］。

禽呼肠病毒是双股RNA病毒，属于呼肠病毒科、呼肠病毒属，其基因组由大（L）、中（M）和小（S）三组基因组成，分为10个节段，σNS基因属于S基因组中S4基因，其编码的蛋白是一种较小的非结构蛋白，具有单股RNA（ssRNA）结合活性，目前已知的σNS蛋白功能与病毒中mRNA有关，并且与基因组的复制有关［2－4］。

目前，对禽呼肠病毒的检测已建立了很多方法，主要有病毒中和试验、琼脂扩散试验、ELISA［5］、RT－PCR［6］和荧光定量 RT－PCR［7－9］等，基于单克隆抗体（mAb）建立的免疫检测技术，具有特异性强和敏感度高的优点，在疾病诊断方面已得到了广泛的应用。目前，未见有针对ARVσNS的单克隆抗体，本研究利用σNS蛋白筛选出抗ARVσNS蛋白的特异性单克隆抗体，并对其生物学特性进行鉴定，为建立一种敏感、特异、快速、简便的ARV临床检测方法奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 ARV S1733毒株，由美国康州大学Khan博士惠赠；骨髓瘤细胞SP2／0由美国宾夕法尼亚州州立大学动物诊断中心刘教授惠赠；ARV R1、ARV R 2以及鸡新城疫病毒（LaSota，NDV）、H9亚型禽流感病毒（AIV H9）、鸡传染性支气管炎病毒M41（IBV M41）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）由广西畜禽疫苗新技术重点实验室保存。……