犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析

姜燕霞，张淑玲，王金良，申识川

（1.滨州医学院附属医院，山东滨州256603；2.滨州市妇幼保健院，山东滨州256600；3.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；4.湖南省宁远县畜牧水产局，湖南宁远425600）

犬细小病毒病（Canine parvovirus disease，CPVD）是由犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）引起的犬的一种急性、烈性传染病，该病于1978年在美国首次发现，目前呈世界范围内流行，是危害犬类的最重要传染病之一，每年都给全球养犬业和宠物行业带来了巨大的经济损失［1－5］。CPV属于细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus），基因组为单股线状DNA病毒，全长为5.0kb，编码2个结构蛋白（VP1、VP2），其中VP2蛋白是保护性颗粒抗原，可诱导机体产生中和抗体，VP2中的几个关键碱基和氨基酸的变化就可改变病毒的抗原特性和宿主范围［4－6］。近年来，CPV不断出现新的变异情况，分离鉴定CPV的当地流行毒株以及对结构蛋白VP2基因进行序列分析是了解和掌握CPV变异趋势的主要方法［4.6－7］。本研究从疑似犬细小病毒感染犬粪便中成功分离鉴定一株CPV，并进行了VP2基因序列分析，旨在丰富我国CPV分子流行病学资料，为CPV新型疫苗与诊断试剂的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 2012年4月山东济南某宠物医院收诊一例病犬，其临床症状表现主要为呕吐、体温升高、精神沉郁、排血便。其血便经犬细小病毒胶体金快速诊断试纸条检测为阳性。采集疑似犬细小病毒感染病犬的血便作为病料。

1.1.2 细胞与菌株 胎猫肾传代细胞（FK81），大肠埃希菌菌株DH5α，均由本实验室保存。

1.1.3 主要试剂 ExTaq酶、dNTP、pMD18－T载体为宝生物工程（大连）有限公司产品；……