参草通脉颗粒三七总皂苷提取工艺优化研究△

黄忠钧，张艳，孟宪生，王思尹

(1.沈阳市沈河区妇婴医院，辽宁 沈阳 110011；2.辽宁中医药大学 附属医院，辽宁 沈阳 110847)

参草通脉颗粒三七总皂苷提取工艺优化研究△

黄忠钧1，张艳2*，孟宪生2，王思尹2

(1.沈阳市沈河区妇婴医院，辽宁 沈阳 110011；2.辽宁中医药大学 附属医院，辽宁 沈阳 110847)

目的：为了更好地控制参草通脉颗粒的质量，对其主要药味三七中的三七总皂苷优化提取工艺，为该制剂的质量控制提供科学依据。方法：采用正交试验法，以三七总皂苷的提取量及浸膏得率为考察指标，优选回流法提取三七总皂苷的最佳工艺条件。结果：三七总皂苷的最佳提取工艺为以8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h。结论：优选的提取工艺设计合理、简便易行，三七总皂苷提取率高。

参草通脉颗粒；三七总皂苷；提取工艺

参草通脉颗粒是笔者经过长期临床实践总结得出治疗慢性心衰的经验方，具有益气活血、利水通脉的功效，临床疗效显著，受到了广大患者的欢迎和好评。经过多中心、大样本、随机双盲方法观察其疗效明确。三七是参草通脉颗粒的主要药味之一，具有散瘀止血、消肿定痛的功效。作者以三七总皂苷的含量为考察指标,采用正交设计优化三七中三七总皂苷的提取工艺[1-2],旨在制定科学经济的三七提取工艺,对三七的质量进行综合评价，为参草通脉颗粒的质量控制与推广应用奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪：手动进样器、二极管阵列检测器(DAD)，AR2140型电子分析天平(Ohaus Corps，USA)：感量0.1 mg。

1.2 试剂与试药

三七总皂苷对照品(中国食品药品检定研究院)；三七(辽宁省中药饮片有限公司)，经鉴定为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F. H. Chen的干燥根。甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：甲醇-水(80∶20);柱温：25 ℃;检测器：二极管阵列检测器(DAD);检测波长：270 nm;流量：1.0 mL·min-1。理论塔板数按三七总皂苷计算不少于3 500，分离度大于1.5。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取三七总皂苷2 mg置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密吸取储备液1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得(每1 mL含三七总皂苷20 μg)。

2.3 供试品溶液的制备

取三七粉末约3 g(过三号筛)，精密称定，按正交各试验条件回流提取2次，合并两次提取液，定容，摇匀，过0.45 μm的微孔滤膜，备用。

2.4 测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定供试品中三七总皂苷的提取量。

2.5 干膏率测定

精密量取25 mL的醇提液，置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，移于干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，计算干膏收率。干膏收率(%)=干膏重量/三七重量×100%。

2.6 数据处理

根据所选指标进行多指标综合评分，以各组指标中的最大值为参照将数据进行归一化，分别给出权重系数。三七总皂苷(PNS)提取量和浸膏得率的权重系数分别为0.80、0.20，并计算出综合评分进行统计分析。PNS评分=(PNS含量/最大PNS含量)×0.8；干膏收率评分=(干膏收率/最大干膏收率)×0.2；综合评分=PNS评分+干膏收率评分。

2.7 提取工艺条件

工艺筛选为全面考察影响三七总皂苷提取的因素,首先对提取溶媒进行考察,并采用正交设计优化提取工艺。

2.7.1 不同醇浓度 取三七粉末(过40目)8份，每份2 g，精密称定，分别加水、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇各20 mL，水浴加热回流提取2次，每次1 h，取提取液分别测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的含量，见表1。

表1 不同醇浓度提取液中三七中三七总皂苷(PNS)的含量 /mg·g-1

结果表明，用70%乙醇提取时三七中三七总皂苷的提取量均较高。因此确定提取溶媒为70%乙醇。

2.7.2 正交试验设计 选择提取次数、溶媒量、提取时间为考察因素，每个因素选择3个水平，进行L9(34)正交试验考察，优选最佳提取条件。用加权综合评分，以三七总皂苷(PNS)含量为主指标(权重系数均为0.8)，干膏收率(权重系数为0.2)为次指标，即综合评分作为考察指标确定三七提取条件。水平表见表2，正交试验设计表及结果见表3，方差分析见表4。

以直观分析及方差分析对实验结果进行评价，结果表明，影响提取工艺的因素主次顺序为B>C>A，其中提取次数(B)对药材提取率影响最大，差异具有统计学意义(P<0.05)。溶媒量(A)和提取时间(C)的水平之间差异不大。因此筛选确定提取条件为A2B3C3，即以8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h。

2.7.3 提取正交试验验证 为了考察所选择最佳工艺的稳定性,需对其进行验证。称取三七粗粉3份,每份50 g,分别用8倍量70%乙醇提取4次,每次1.5 h。所得总皂苷平均值为92.15 mg·(g生药)-1(n=3),说明所选提取工艺条件稳定。

表2 三七回流提取因素水平表

表3 正交试验设计表及结果

表4 方差分析

注：(1)n=2,(2)F0.05(2,2)=19.00

3 讨论

参草通脉颗粒是治疗慢性心衰的有效方剂，临床经过多中心、大样本、双盲法观察证明了其疗效突出,可以明显改善病人症状，提高病人生活质量，降低再住院率等。通过实验研究表明其可以改善冠脉供血，降低血黏度。主要组方药物三七中三七总皂苷为主要活性成分, 包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re和三七皂苷R1等多种单体皂苷[3]。现代药理研究表明三七总皂苷具有改善血液系统和心血管系统、滋补强壮、调节免疫等方面的作用[4-5]。目前,提取三七总皂苷的主要方法为水提法和乙醇加热回流法[6-7]。

本文通过正交试验优化三七皂苷的提取条件，结果表明三七总皂苷宜采用少量溶媒、短时间、多次数的提取工艺，可提高其提取率。实验中发现, 三七粉碎过细时,因含大量皂苷极易产生泡沫和暴沸,不适宜大生产。实验所确定最佳乙醇回流工艺为8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h，具有耗醇量少、提取率高、质量稳定、重复性好，表明该提取工艺合理可行，为优选三七总皂苷的提取工艺提供了科学依据，为参草通脉颗粒的质量控制与推广应用奠定了基础[6-7]。

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[3] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：369-370.

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[6] 穆启运,阮新民.护心颗粒中人参和三七的皂苷成分的提取工艺研究[J].时珍国医国药,2010,21(7)：1636-1638.

[7] 谭朝阳,尤昭玲,袁宏佳.三七渗漉提取工艺的研究[J].中国中医药信息杂志,2010,17(4)：51-52.

StudyonExtractionProcessofTotalSaponinsofPanaxnotognsengfromShencaoTongmaiGranule

HUANG Zhong-jun1, ZHANG Yan2*, MENG Xian-sheng2, WANG Si-yin2

(1.ShenheMaternalandInfantHospitalofShenyang,Shenyang110011，China；2.TheHospitalAffiliatedtoLianningUniversityofTCM,Shenyang110847，China)

Objective：To develo Pquality control method of Shencao Tongmai Granule.Explore the best conditions of extract total saponins fromPanaxnotognsengby ethanol.Methods:Examined total saponins ofPanaxnotognsengand Yield of extract by orthogonal design to optimize refluxing method.Results:The optimal extraction process was refluxing four times with 8 times the amount of 70% alcohol,1.5 hours each time.Conclusion:Optimization extraction process design is reasonable and available，extraction rate of Tanshinone is higher.

Shencao Tongmai Granule;Total saponins ofPanaxnotognseng;Extraction technology

2012-10-16)

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国家十一五科技支撑计划——中医治疗常见病研究：中医药干预慢性心衰的临床治疗方案研究(2007BAI20B076)

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张艳，E-mail：yanzhang1016@126.com