应用PCR方法检测DYS287位点多态性

廖启洪 李丽敏 刘怡仱 余洪立 孟 晓 吕 程 潘柳吟 梁志东

广西壮族自治区柳州市人民医院，广西 柳州 545006

应用PCR方法检测DYS287位点多态性

廖启洪 李丽敏 刘怡仱 余洪立 孟 晓 吕 程 潘柳吟 梁志东

广西壮族自治区柳州市人民医院，广西 柳州 545006

目的：调查广西瑶族、壮族、汉族群体中DYS287基因位点的遗传多态性分布。方法：采用聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测方法对132例白裤瑶族、149例壮族、172例汉族样本DYS287位点多态性进行检测分析。结果：三个民族人群均未发现插入YAP＋个体。结论：获得广西白裤瑶族、壮族、汉族群体DYS287基因座的遗传学数据，为这三种民族遗传关系的分析、法医学鉴定及该民族的起源提供了一定的遗传背景资料。

PCR；DYS287；多态性

Y染色体Alu多态性（即YAP）是一个应用广泛，而且具有较高价值的位点。检测不同群体中YAP＋率可以研究不同群体间的遗传关系和迁徙历史［1－2］。2010年以来，我们应用PCR方法对广西瑶族、壮族和汉族人群进行Y染色体DYS287位点多态性检测分析，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 根据 “知情同意原则”，随机分别抽取广西瑶族男性132例、壮族男性149例3代内无族外通婚彼此间无亲缘关系的静脉血2ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，同样取汉族彼此间无亲缘关系男性172例血样。

1.2 DNA提取 采用传统的酚－氯仿法抽提基因组DNA，溶于TE中，标化为10～20mg／L，－20℃保存备用。

1.3 PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测 YAP－1 5′－CAG GGG AAG ATA AAG AAA TA－3′YAP－2 5′－ACTGCTAAA AGG GGA TGG AT－3′，25μl反应体系中包含基因组DNA 25－40ng，0.12μmol／L引物，2.0 mmol／L dNTP，2.5 mmol／LMgCl，0.5U Taq DNA聚合酶。PCR反应条件：95℃预变性2min，然后在94℃变性1min，59℃退火1min，72℃延伸1min条件下循环30次，最后于72℃延伸10min，产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测。

2 结果

Y染色体DYS287位点琼脂糖凝胶电泳结果见图1。YAP＋个体的PCR扩增片段为455bp，YAP－个体的PCR扩增片段为150bp。本组456例广西瑶族、壮族和汉族研究男性个体均未发现YAP＋扩增产物。

3 讨论

DYS287位点是位于人类Y染色体长臂（Yq11）的一个Alu序列插入多态，属于Y—SNP位点。不同人群中的YAP多态性是由于人类在不断的迁移过程中，人类祖先中携带Alu元件的群体与不携带Alu的群体发生基因交流造成的［3］。Y染色体为父系遗传，除开长臂和短臂末端的拟常染色体区在减数分裂中与X染色体发生重组外，其余的大部分Y特异区不发生重组，而是以单倍体形式由父传给子，能够忠实记录了父系进化的历史。

国内外研究表明DYS287位点是研究不同群体间遗传结构的较理想的遗传标记，各民族各地区YAP阳性率存在着明显的差异。例如日本人群YAP＋平均率达42%［4］；非洲黑人中YAP＋频率高达79%，欧洲人群中YAP＋只有4%－11%［5－6］；国内藏族、土族、彝族和普米族人群表现出很高的YAP阳性率，塔吉克族、白族、基诺族、仫佬族、毛南族和山东汉族也有YAP阳性，鄂温克族、鄂伦春族、达斡尔族、黎族、傣族、拉祜族、佤族、等少数民族均没有发现YAP阳性个体，表现出西北和南部较高，东北和中部地区则偏低的趋势。

我们应用PCR方法对广西壮族男性DYS287位点多态性进行了检测，没有发现YAP＋个体，与陈阳等研究报道相一致［7］。我们以同样的方法对广西汉族、瑶族男性DYS287位点多态性进行了检测，结果汉族、瑶族YAP＋频率均为0，这与云南汉族［7］结果一致。

中国少数民族众多，壮族和瑶族只是其中的一元，仅用DYS287位点对这两个民族的筛查频率不足以分析其遗传关系和起源提供足够证据，但能够提供有价值的线索，为壮、瑶两个民族群体遗传关系的分析、法医学鉴定及群体的起源提供了一定的遗传背景资料。

［1］周瑞霞，安黎哲，伊琳，等.甘肃3个特有少数民族回族和汉族DYS287DYS19的遗传多态性研究［J］.兰州大学学报，2006，42（2）：38－42.

［2］石宏，董永利，李卫翔，等.中国云南25个少数民族Y染色体DYS287位点的地理多态性［J］.中国科学：C辑，2002，32（4）：373.

［3］文普帅，温有锋，席焕久，等.西藏藏族DYS287位点多态性研究.Medical Journal of the Chinese people’s Armed Police.2007，18（2）：89－90.

［4］Hammer MF，Spurdle AB，Karafet T，et al.The geographic distribution of human Y chromosome variation.Genetics，1997，145（3）：787－805.

［5］Spurdle AB，Hammer MF，Jenkins T.The Y－Alu polymer.－phism in southern African populations and its relationship to other Y－specific polymouphisms［J］.Am JHum Genet，1994，54（2）：319－330.

［6］Hammer MF，Horai S.Y chromosomal DNA variation and the peopling of Japan［J］.Am JHum Genet，1995，56（4）：951－962.

［7］陈阳，褚嘉祐，俞建昆，等.中国28个民族群体Y染色体DYS287位点的遗传多态性［J］.中国医学科学院学报，2006，28（2）；196－201.

Polymorphism s of DYS287 locus in Yao and Zhuang and Han in Guangxi

LIAO Qihong，LILimeng，LIU Yiling，YU Hongli，MENG Xiao，LV Cheng，PAN Liuyin LIANG ZHidong The people’s hospital of Liuzhou，GuangXi，Liuzhou 545006，China

Objective：To study the polymorphisms of DYS287 locus ofmale Han and Zhuang and Yao nationality in Guangxi.Methods：The polymorphisms of DYS287 locus inmale 172 Han and 149 Zhuang and 135 Yao were analyzed by PCR and agarose gel electrophoresis.Results：With YAP＋were not found in three population.Conclusion：The genetic data of DYS287 locus ofmale Han and Zhuang and Yao nationality in have been obtained，and theymight be useful in studies of population origin，relationship between populations，and forensic applications.

PCR；DYS287；polymorphisms

R739

A

1007－8517（2013）11－0030－02

2013.03.08）

广西卫生厅基金项目（Z2007303）。

廖启洪 （1964～），主任技师，研究方向优生遗传。