HLA-B27/B7抗原检测在诊断强直性脊柱炎中的临床价值

罗玲 严海燕 罗晓红

强直性脊柱炎(AS)是一种常见的慢性炎症性关节病，主要影响脊柱关节及骶髂关节，主要发病于年轻男性。该病诊断的直接证据是X线下脊柱的特征性改变及骶髂关节炎，但这种改变只有在疾病发展到一定的程度时才能被观察到。HLA抗原是人类主要组织相容性复合体(major histocompatibity complex，MHC)的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因。人们在很早就发现了HLA-B27抗原的表达与AS有着高度的相关性[1，2]。在临床上，由于AS的症状与许多疾病相似而难以确诊，因此，HLAB27的检测在AS的诊断中有着重要的意义。本文用流式细胞仪检测AS患者外周血淋巴细胞HLA-B27的表达，探讨其在临床诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院2009年1月至2012年1月到骨科、风湿科住院的144个病例，其中男110例，女34例，平均年龄34.1岁，20以下38例，20～30岁29例，30～40岁26例，40岁以上51例。其中有90例患者是采用1984年纽约修订的AS诊断标准确诊为AS。

1.2 仪器与试剂 仪器采用美国贝克曼公司的Beckman-Coulte FC500流式细胞仪，单克隆抗体HLA-B27-FITC/HLAB7-PE、溶血素、鞘液均来自贝克曼公司的标准试剂盒。

1.3 方法 操作按SOP要求，取流式管2支，分别加入5 μl单克隆抗体(HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE)和同型对照(IgG2a-FITC/IgG1-PE)，分别向两支管中加入50 μl混匀的抗凝全血，混匀后室温避光15～20 min，然后加入溶血素300 μl，混匀后室温避光10 min，加入500 μlPBS，1500r/min 离心5 min，弃上清，加入 500 μlPBS，混匀上机测样。

1.4 获取数据 采用流式细胞仪自带的软件获取数据并进行分析。如图1所示，先通过FS-SS双参数图圈定淋巴细胞设门，再分析淋巴细胞中HLA-B27+/HLA-B7-细胞群的荧光强度和百分比。

2 结果

2.1 不同年龄段HLA-B27阳性率的比较见表1，可以看出AS的好发人群主要是青少年。

2.2 不同性别HLA-B27阳性率的比较见表2，可以看出男性(70.9%)要显著高于女性(41.2%)。

图1 通过FS-SS双参数图圈定淋巴细胞设门

图2 淋巴细胞中HLA-B27+/HLA-B7-细胞群的荧光强度和百分比

表1 不同年龄段HLA-B27阳性率的比较(例，%)

表2 不同性别阳性率的比较(例，%)

2.3 AS患者与非AS患者HLA-B27的阳性率的比较见表3，由表3可得HLA-B27检测对诊断AS的出灵敏度为91.1%(82/90)，特异度为81.5%(44/54)，正确率为87.5%(126/144)。

表3 AS患者与非AS患者的阳性率的比较(例)

3 讨论

AS发病原因未明，发病早期主要累及骶髂关节、髋关节、椎间关节。由于发病隐匿，临床表现复杂多样，影像学改变不典型，常被忽视为腰肌劳损等其他疾病而被误诊或漏诊，是目前临床上误诊率很高的一种疾病。晚期，患者出现脊柱强直，活动受限，甚至致残[3]。目前AS的诊断主要按照1984年纽约修订的诊断标准，除要求患者存在X线≥2级骶髂关节炎，还要求存在腰椎活动受限，胸椎活动降低等损害。所以患者可能在数年之后才能被确诊，此时就已经失去了最佳治疗的时机，并导致致残率很高。因此，AS的早期诊断成为了争取良好预后的关键[4]。

HLA-B27基因定位于人类第6号染色体短臂上，由8个外显子和7个内含子组成。HLA-B27抗原几乎表达于所有的有核细胞，特别是淋巴细胞表面，自1973年Brew erton等率先报道其与AS密切相关以来，世界范围内对HLA与疾病的相关性研究与探讨一直不断。不同种族、不同地区人群的研究结果显示，HLA-B27抗原与AS的相关性是迄今已知HLA与疾病相关中最强和最典型的。但是对于HLA-B27与AS发病机制之间的关联尚不清楚，现在认为，HLA-B27阳性者易患AS的原因，是由于这种人的抗原提呈细胞能结合某些微生物抗原，将其抗原多肽提呈给T细胞。这些微生物抗原多肽与AS的致病多肽有同源性，可模拟致病多肽起作用。HLA-B27阳性者感染这些微生物是AS发病的直接原因[5]。

有研究发现，HLA-B27阳性者患AS的概率是阴性者的200～300倍[6]，10年内有70～90%发展成为 AS。近年国外报道，AS发病对HLA-B27有剂量依存关系，即纯合子HLAB27的人发病的危险性高，发病后病情重。在AS、反应性关节炎等发病中，HLA-B27阳性患者的亲属发病危险性比HLAB27人群又高10倍[7]，因此，认为 HLA-B27检测可作为 AS的筛选方法[8]，并且对AS的预防也有一定的意义。我们在临床上有必要对疑似AS的病例和HLA-B27阳性的一级亲属开展HLA-B27抗原的检测。本研究中AS确诊患者HLA-B27阳性率为91.1%，与文献报道的90%以上相符。

HLA-B27抗原的检测目前常规使用流式细胞术，在国外，经过长期的方法质量验证证明[9]，流式细胞术检测HLAB27抗原标准化程度高，可同时测定细胞多个参数，敏感性好、特异性好、重复性好，结果判断准确，且操作简单快捷，所需标本量少，无需分离单个淋巴细胞，是目前最优的检测方法。本文使用的流式细胞术检测HLA-B27抗原的灵敏度为91.1%，特异性为81.5%，正确率为87.5%，显示HLA-B27抗原与AS密切相关。但仍有一部分AS患者HLA-B27抗原呈阴性，故临床应引起注意，HLA-B27阴性并不能排除AS。

在临床上，如症状和体征提示AS，HLA-B27抗原阳性会显著增加正确诊断的机会，对疑似AS患者开展HLA-B27抗原的检测，有利于为他们提供诊断和鉴别诊断的线索，弥补X线的不足。总之，HLA-B27抗原有利于AS的早期诊断和防治，使疾病的发展得到及时控制，避免致残，提高生活质量。采用流式细胞术检测HLA-B27抗原，对于AS的诊断有很好的特异性、灵敏度，可靠、准确，且操作简便，是一种很好的检测方法，值得临床常规开展此项检查。

[1]Breweton DA，Hart FD.Ankylosing spondylitis and HLAB27.Lancet，1973，1(13):904-907.

[2]Schlosstein L，Terasaki PI，Bluestone R，et al.High association of HLA antigen，W27 with ankylosing spondylitis.New Eng J Med，1973，288(14):704-706.

[3]王桂叶，孙振昌，张明智.强直性脊柱炎与HLA-B27关联性的分析.中原医刊，2006，33(5):11-12.

[4]金朝晖.强直性脊柱炎的早期诊断.北京医学，2005，27(11):688-689.

[5]Khure SD，Lathra HS，Davis CS.Role of HLA-B27 in spondyloarthropathies.Curr Top Microbiol Immunol，1996，206:85-100.

[6]李维，吴强.HLA-B27亚型及其强直性脊柱炎关系的研究进展.免疫学杂志，2002，18(3):191-194.

[7]Feltkamp TE.Factors involved in the pathogenesis of HLA-B27 associated arthritis.Scand J Rheumtol，1995，101(Suppl):213-217.

[8]Khan M A.An over view of clinical spectrum and heterogenerity of spondylo arthro apat hies.Rheum Dis Clin North Am，1992，18(1):1-10.

[9]Macardle PJ，McEvoy R，Jovanovich S.HLA-B27 expression by flow cytometry:an analysis of 7 years quality assurance data.J Immunological Methods，2000，5(243):51.