不稳定型心绞痛患者外周血内皮祖细胞与冠状动脉狭窄程度的关系＊

南方医科大学附属东莞市石龙人民医院心血管内科（东莞523326）陈杰民 涂 昌 梁逸仙 兰 军 陈本发 刘映峰

外周血内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells，EPCs）是一种存在于血液循环系统中能够增殖并分化为成熟内皮细胞的前体细胞，对微血管新生、损伤血管内皮修复和功能维持中有重要的作用。1997年Asahara等发现，在循环外周血中存在一种能分化为血管内皮细胞（ECs）的前体细胞，并将其命名为EPCs［1］。EPCs表面有特异的标记物，如CD34及CD133，是鉴定EPCs的标志。研究表明，EPCs在出生后的机体中作为能特异性聚集于缺血损伤部位并增殖分化为ECs的一群前体细胞，不仅参与了人胚胎血管的生成，同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程［2］。研究表明，外周血EPCs在稳定性心绞痛患者较正常人有明显降低，而急性心肌梗死患者在短期内反而增加［3］，但不稳定性心绞痛患者外周血EPCs的水平目前意见尚不统一，我们拟通过研究外周血EPCs的数量同不稳定性心绞痛患者冠状动脉病变程度的相关性，探讨EPCs在不稳定性心绞痛患者中的作用。

对象及方法

1 研究对象 选取2011年3月至2012年8月在我院心血管内科住院确诊的，年龄在45～69岁的不稳定性心绞痛患者53例为患者组，诊断符合中华医学会心血管病学分会制定的标准，入院前1个月内具有典型心绞痛的症状、心电图示缺血性ST段异常改变，且入院实验室检查心肌酶及肌钙蛋白值无异常改变。选择同期同年龄段行冠脉造影证实无冠状动脉病变的患者33例为对照组。实验组及对照组均排除肿瘤、严重肝肾功能不全、急性脑血管意外、糖尿病等疾病，入院时未服用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）及血管紧张素受体阻断剂（ARB）类降压药及抗凝和调脂药。

2 研究方法 ①流式细胞仪测定EPCs数量：选择入院后准备进行冠脉造影的患者，采用EDTA管抽取静脉血2ml，流式细胞仪检测外周血CD34及CD133的细胞含量（美国BECKMAN.COULTER公司），CD133流式细胞荧光抗体一抗购于Neomarker公司，二抗购于Southern Biotech公司，CD34流式细胞荧光抗体购于BD公司。取200μl外周血与CD133流式细胞荧光抗体一抗孵育20min，再加入CD133二抗孵育20min，之后加入CD34流式细胞荧光抗体孵育20min。最后将红细胞溶解，剩余细胞用20g／L多聚甲醛固定，以流式细胞仪进行检测。CD34和CD133双阳性细胞为EPCs，计算100000个单个核细胞CD34及CD133阳性细胞数量。②冠状动脉血管狭窄程度评估：所有患者完善相关检查后行冠状动脉造影，根据Gensini评分系统对每支血管狭窄程度进行定量分析：0分为无异常、1分为狭窄程度＜25%、以此类推2分（26%～50%）、4分（51%～75%）、8分（76%～90%）、16（91%～99%）、100%（闭塞）为32分，并按照病变部位乘以相应的系数。每例患者最终评分为各分支评分之和。

3 统计学处理 采用SPSS15.0统计软件进行统计学分析，计量资料采用±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，相关分析采用单因素直线相关分析法，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 患者组与对照组比较 患者组血清总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平明显高于对照组，患者组外周血内皮祖细胞（EPCs）数量明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），见表1。

表1 两组人群基本特征分布

2 不同Gensini评分患者EPCs数量比较 患者组患者中，EPCs数量随着Gensini评分的增加而升高（P＜0.05，表2、附图）；Gensini评分与外周血内皮祖细胞（EPCs）数量呈正相关（r＝0.693，t＝28.254，P＜0.01）.

表2 不同Gensini评分患者EPCs数量比较

讨 论

早在1999年T.Takahashi就从动物试验发现：EPCs有维持血管内皮的稳定和参与新生血管形成的作用，因而外周血EPCs的水平可反映出冠状动脉血管内皮化的程度［2］。相关研究发现，EPCs具有促进血管新生、修复损伤内膜等作用，并可用于组织工程血管的制备，在心血管疾病的预防和治疗上具有很好的前景［3］。研究发现，作为机体对心肌缺血和内皮受损的一种代偿性反应，在组织的再灌注缺血缺氧性损伤过程中，内皮祖细胞从骨髓中动员至外周血，参与血管的新生和血管内皮的修复［4］。

附图 流式细胞仪检测的外周血EPCs散点图

本研究发现，不稳定性心绞痛患者中，外周血EPCs数量明显低于对照组，说明冠状动脉粥样硬化发生发展的多项因素能影响外周血中EPCs的数量。研究显示，心血管危险因素中的高血压LDL、超酸C反应蛋白（hsCRP）等均可使外周血EPCs的数量减少［5］。此外，由于EPCs参与内皮损伤后的修复，持续的内皮损伤和内皮功能障碍可导致EPCs过量消耗［6］。

此外，本研究还发现，不稳定性心绞痛患者中，冠状动脉狭窄程度较严重的患者外周血EPCs数量高于狭窄程度较低的患者。国外研究发现［7］，心绞痛发作时，循环中EPCs的含量增加，提示冠状动脉的急性缺血及内皮损伤是EPCs从骨髓动员入血的一个确切的刺激因素。不稳定性心绞痛的患者因其冠脉斑块不稳定而易导致心肌缺血加重，可能会存在有EPCs动员入血，通过增加外周血EPCs的含量，促进血管新生和血管内皮修复从而达到改善心肌缺血再灌注损伤的目的。

总之，内皮功能障碍的本质是内皮损伤和修复之间的动态平衡的破坏，EPCs在维持心血管系统稳定状态中起着重要作用，甚至可以将EPCs池作为心血管系统是否健康的一面镜子。本研究通过观察不稳定性心绞痛患者的外周血EPCs水平，从而明确冠脉病变的程度与外周血EPCs水平相关，有助于了解冠心病不稳定性心绞痛的冠脉病变情况。同时，进一步分析不稳定性心绞痛患者在急性冠脉缺血时出现的内皮祖细胞动员情况，可为内皮祖细胞在急性冠脉综合征时的移植提供理论依据。

［1］Asahara T，Murohara T，Suilivan A，et al.Isolation of Putative Progcnitor endothelial Cells for angiogenesis［J］.Science，1997，275：964-967.

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［4］Gibson，CP Cannon，WL Daley，et al.TIMI frame count：aquantitative method of assessing coronary artery flow［J］.Circulation，1996，93（5）：879-888.

［5］Fontaine V，Filipe C，Wemer Net al.Essential role of bone marrow fibroblast growth factor-2in the effect of estradiol on ieendothelialization and endothelial progenitor cell mobilization ［J］.J Hum Hypertens，2008，22（3）：183-190.

［6］李 军，马长生.冠状动脉慢血流现象的研究进展 ［J］.心血管病学进展，2010，31（3）：356-359.

［7］Sezgin N，Baruteu I，Sozgin AT，et al.Plasma Nitric Oxide level and its role in slow coronary flow phenomenon［J］.Int Heart J，2005，46（3）：373-382.