马腺疫链球菌的分离与鉴定

陈新华，康立超，黄 新，韩猛立，何延华

（1.新疆生产建设兵团农四师七十七团，新疆 伊犁835601；2.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 绵羊繁育生物技术重点实验室，新疆 石河子832000）

新疆伊犁马的主要繁育基地在昭苏马场，随着自治区大畜牧业的发展，确定了“以马产业为主导产业”的发展战略，重点发展养马业和马产品的综合产业。随着马产业的迅速发展，马腺疫又重新抬头，不仅阻碍了马驹的生长发育，还影响着马匹的美观，甚至导致死亡。2011年在昭苏马场出现马腺疫，发病率80%～100%，死亡率不高。病原分离鉴定及其16SrDNA序列分析报告如下。

1 材料与方法

1.1 病料来源无菌采集6匹病马的颌下淋巴结肿胀化脓液。

1.2 试剂 普通肉汤和琼脂平板、5%绵羊鲜血平板、LB液体培养基、PBS水溶液，2xTaqPCR Master Mix、ddH20、DNA Marker DL－2 000，购自北京天根生化科技有限公司，链球菌生化鉴定试剂盒和链球菌生化编码鉴定手册，购自杭州天和微生物试剂有限公司；试验用昆明系小鼠24只，购自石河子大学实验动物中心。

1.3 方法

1.3.1 病原菌的分离纯化与染色镜检 将无菌采集的脓液划线接种于普通琼脂平板和绵羊鲜血平板，37℃培养48h后，挑取单菌落进行纯化培养，直到菌落形态稳定一致，保存菌种。

将脓液抹片，瑞氏染色和革兰染色，挑取单菌落和肉汤培养物进行革兰染色，在光学显微镜下观察细菌的形态特征。

1.3.2 生化鉴定 将分离菌分别接种于链球菌生化鉴定试剂盒，37℃培养24h，加入指示剂，观察结果，根据链球菌生化编码鉴定手册（GYZ－12St）鉴别分析，认定指数接近100为可靠结果。……