不同浓度脂联素对HepG2细胞内甘油三酯含量的影响及其机制

阳 琰，邓华聪，龙 健，苏艳新，瞿 华，胡振平

（重庆医科大学附属第一医院内分泌科，重庆 400016））

高甘油三酯（hypertriglyceridemia，HTG）所致的脂毒性近年来已引起人们的高度重视。HTG能抑制胰岛素的信号传递，从而引起并加重胰岛素抵抗（insulin resistance，IR），使胰岛素的生物效应降低，又能引起葡萄糖刺激的胰岛素分泌障碍，并导致β细胞凋亡，使胰岛素分泌减少［1］，并与心血管病密切相关。人脂联素是脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白质，载脂蛋白A5（apolipoprotein A5，apoA5）是目前所知唯一能够降低血浆甘油三酯（triglyceride，TG）的载脂蛋白，均与TG水平密切相关［2－4］。但是，脂联素与apoA5和TG之间是否呈剂量依赖关系，目前国内外未见相关研究报道。因此，本研究拟通过观察比较不同浓度脂联素对HepG2细胞内apoA5mRNA和蛋白表达水平及TG含量的影响，探讨脂联素与TG之间的剂量依赖关系，以及脂联素降低TG的可能机制。

1 材料与方法

1.1 细胞及主要试剂 HepG2细胞购自北京协和医院细胞库。人脂联素蛋白购自美国R＆D公司。DMEM购于Gibco－BRL公司，胎牛血清购自杭州四季清公司。Trizol regent、逆转录试剂盒和Taq酶均购自Takara公司。PCR引物由上海基康生物技术有限公司合成。apoA5抗体（ab36974）购自Santacruz公司。二抗和细胞蛋白抽提试剂盒均购自凯基生物技术研究所。TG测定试剂盒购自北京中生北控公司。二甲亚砜（DMSO）购自上海博耀生物科技有限公司。

1.2 HepG2细胞培养与分组用含10%胎牛血清的DMEM培养HepG2细胞，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，0.25%胰酶消化，每2～3d更换1次培养基并传代。用不同浓度脂联素（0、12.5、25.0、50.0mg·L－1）作用 HepG2 细胞24h，取生长良好的HepG2细胞（80%），胰酶消化后，调节细胞密度至2×105mL－1，接种于6孔培养板中传代培养，继续培养至细胞贴壁，显微镜下观察细胞密度达5000个细胞／孔，PBS漂洗2次；……