紫外分光光度法测定竹节参中微量元素硒的含量

邓旭坤，李 游，蔡 俭，尹文仲，李林静，米 雪，陈旅翼，朱超珍

(1 中南民族大学 药学院，武汉 430074；2 湖北民族学院 附属医院，恩施 445000)

硒是人类生命必需的微量元素，具有抗癌、抗氧化、增强机体免疫力等作用[1].研究表明：克山病、大骨节病、关节炎和皮肤癌等几十种疾病的发生均与硒有关[1-3]，故硒对人体腱康影响很大.此外，植物的含硒量与土壤有关，土壤含硒量高者，植物含硒量亦高[4].这使富硒药材的开发利用也日益受到关注.

恩施州硒资源富甲天下,是我国迄今发现的第一个高硒区，拥有世界上唯一独立的硒矿床，其土壤中含硒量很高，被誉为“世界硒都”[5].竹节参又名竹节三七，竹节人参，为五加科植物竹节参PanaxjaponicusCA.Mey干燥根根茎，主要分布于长江以南的湖北(恩施)等地区[6].受恩施独特的地理环境影响，恩施产地的竹节参药材硒的含量较其他产地的竹节参要高，更具有较强的富硒功能，故本研究可为道地药材的竹节参独特的药用价值的研发提供参考.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

紫外可见分光光度计(ΜV-1800pc型，上海美谱达仪器有限公司)，超纯水机(ASWO-0005-Μ 艾科浦，重庆颐洋企业发展有限公司)，电热恒温鼓风干燥箱(DGH-80型，武汉瑞华仪器设备有限责任公司).

竹节参药材分别购买于湖北恩施建始县、咸丰县、云南腾冲、云南大理、贵州、陕西，经中南民族大学药学院万定荣教授鉴定.硒标准溶液(100 μg/mL)购于国家计量科学研究院(GBW(E)080215)，使用时配成1.0 μg/mL的标准应用液.5％EDTA-2Na溶液、1％邻苯二胺溶液、8.5％盐酸溶液、10％氢氧化钠溶液、甲苯、浓硝酸、高氯酸均为分析纯，实验用水均为超纯水.

1.2 药材的处理

[7～9]，将药材用蒸馏水洗净，打成粉末，放在60℃电热鼓风干燥箱里烘干，准确称取2.00 g样品于100 mL锥形瓶中，加入浓硫酸10.00 mL，浓硝酸-高氯酸(2︰1)20.00 mL，过夜消化12 h.水浴加热至有棕色的NO2产生，待白烟基本除尽，再加入10.00 mL浓度为8.5％盐酸溶液，继续水浴加热至产生白烟，达到消化终点.用蒸馏水定容于100 mL容量瓶中备用.

1.3 样品的测定方法

将本试验中药材按照“1.2”项下方法处理，准确量取药材的消化液0.50 mL倒入25 mL容量瓶中，加蒸馏水定容，加入5％EDTA-2Na溶液2.00 mL，用HCL和NaOH溶液调节溶液pH= 2.0，加入1％邻苯二胺溶液2.00 mL，避光，放置2 h.用10.00 mL甲苯萃取，大力振荡5 min，于分液漏斗中静置10 min，分离甲苯层，以随行试剂作空白，于335 nm紫外吸收处检测.

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长的选择

精密吸取1 μg/mL的硒标准应用液5.00 mL依“2.2”项，测定紫外可见分光光度计上200～500 nm不同的波长下吸光度，结果表明335 nm处为最大吸收波长，故选择335 nm为测定波长.

2.2 络合酸度的影响

分别取1.0 μg/mL硒标准应用液5.00 mL于6个25 mL锥形瓶中，加蒸馏水定容，加入5％ EDTA-2Na溶液2.00 mL，用HCL和NaOH溶液调节pH分别为1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0，各加入1％邻苯二胺2.00 mL，室温避光放置2 h，加入10.0 mL甲苯，大力振荡5 min，移入分液漏斗中静置10 min，测得不同pH下的吸光度如图1所示.图1中显示，当络合反应酸度pH>3.0时，萃取液吸光度急剧下降；PH在1.0～3.0，吸光度基本不变，表明该反应对体系的酸度有很好的选择性；pH在2.0处有最大吸光度值，故选择pH为2.0.

pH

2.3 络合剂用量的影响

改变邻苯二胺用量以考察络合剂用量对萃取液吸光度的影响.取6份5.00 mL的硒标准应用液(1.0 μg/mL)于6个25 mL容量瓶中，其他试验步骤同“2.2”，分别加入1％邻苯二胺0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，测定结果见图2.由图2可见，邻苯二胺用量大于2.0 mL时，萃取液吸光度值基本不变.故本试验选择邻苯二胺用量为2.0 mL.

V(邻苯二胺)/mL

2.4 络合时间的影响

络合时间影响络合剂与试剂间的作用时间，为研究不同络合时间对萃取液吸光度的影响，取6份5.00 mL的硒标准应用液(1.0 μg/mL)，按“1.3”项下试验步骤，测定吸光度.络合时间在90～150 min范围内最稳定(图3)，选择络合时间为120 min.

t/min

2.5 标准曲线绘制

分别取1 μg/mL硒标准应用溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于6个25 mL锥形瓶中，按照“2.2”项下方法测定吸光度值，由吸光度值与硒含量绘制硒工作曲线，得回归方程为：y=0.0215x-0.0002，r= 0.9997.结果表明，微量元素硒在0～5 μg间吸光度线性关系良好.

2.6 不同产地药材的硒的含量测定

准确量取不同产地药材的消化液0.10 mL倒入25 mL容量瓶中，按照“2.2”项下方法操作，测定吸光度值，并计算微量元素硒的含量，结果见表1.由表1可知，湖北恩施竹节参中的硒含量最高，其中建始县和咸丰县硒含量分别为1.68 mg/g和1.52 mg/g.

表1 不同来源药材中的硒的含量

2.7 加样回收率试验

准确称取0.50 g竹节参(恩施)药材粉末6份，分别精确加入10.00 mL硒标准溶液(100 μg/mL).按照“2.1”项下方法消化，“2.2”项下方法测定吸光度值.计算平均加样回收率为101.43 ％，RSD为3.74 ％.

3 结语

本文所测来自湖北恩施、云南、贵州、陕西地区的6份竹节参药材中，来自恩施地区的竹节参药材硒的含量最高，其中建始县的硒的含量最高为1.68 mg/g，咸丰县为1.52 mg/g，贵州产竹节参硒含量最低为0.03 mg/g，其余地区药材硒的含量也与恩施产竹节参有较大差异.故来自“世界硒都”恩施地区的道地药材竹节参更有其独特的药用价值.

参考文献

[1]屈兰竺,杨松杰,禚 苏,等.微量必需元素硒的作用探析[J].中国农学通报,2010,26(7):94-97.

[2]Schomburg L,Schweizer U,Köhrle J.Selenium and selenopro-teins in mammals: extrodinary,essential ,enigmatic[J].Cell Mol Life Sci,2004,61(16):1988-1995.

[3]Clark L C,Combs G F Jr,Turnbull B W,et al .Effects of selenium supplementation for cancer prevention in patients with carcinoma of the skin.A randomized controlled trial[J].JAMA,1996,276(24): 1957-1963.

[4]臧世臣,倪树林,李长林,等.16种野生植物硒含量与土壤硒的关系[J].林业科技,1996,21 (4):41-42.

[5]王祥春.浅析恩施硒产业发展的现状和机遇[J].科技情报开发与经济,2007,17(22):120-122.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:129.

[7]周跃花,杨菊香,张 娜.紫外分光光度法测定紫阳富硒茶中的硒[J].西北农业学报,2009,18 (4):229-232.

[8]林向成,汤 泉,韦学丰.红薯中硒含量的测定[J].应用化工,2011,40(12):2212-2216.

[9]黄 锋,张永瑞.紫外分光光度法测定天麻中的微量元素硒[J].云南化工,2011,38(6):36-38.