小细胞肺癌组织CD56、CgA、Syn及TTF-1表达及联合诊断意义

，，，，，

(青岛大学医学院附属青岛市市立医院病理科，山东 青岛 266071)

肺癌是我国常见恶性肿瘤之一，近年来其发病率和病死率不断上升[1]。小细胞肺癌(SCLC)占全部肺癌的15%～20%，是一种高度恶性肿瘤，生长迅速，可早期发生转移，目前治疗主要是以化疗和放疗为主的综合治疗措施。研究表明，SCLC中神经内分泌的免疫标记物如神经细胞黏附分子(CD56)、嗜铬蛋白A(CgA)、突触素(Syn)有不同程度的表达[2-3]；也有研究结果表明，甲状腺转录因子-1蛋白(TTF-1)在SCLC中表达较高[4]。本研究通过免疫组化法检测SCLC与非小细胞肺癌(NSCLC)组织中CD56、CgA、Syn及TTF-1的表达，旨在探讨其对SCLC联合诊断的价值。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集2009年11月—2012年3月我院病理科确诊的活检或手术切除的SCLC标本62例(实验组)。实验组62例中，男58例，女4例；年龄41～79岁，中位年龄为64岁；其中2例为中分化鳞癌并SCLC,2例为低分化鳞癌并SCLC，2例为SCLC伴局灶腺癌；活检组织34例，手术组织28例；有吸烟史者48例(77.4%)；中央型60例，周围型2例；局限期20例，广泛期42例；有淋巴结转移者38例。随即选取NSCLC病人40例标本作为对照组(腺癌22例，鳞癌12例，大细胞癌6例)。

1.2 试剂及方法

标本均经过40 g/L的中性甲醛固定、石蜡包埋及常规连续切片。切片经脱蜡、水化后放入PBS冲洗，柠檬酸缓冲液中微波处理修复；以体积分数0.03的过氧化氢室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶，依次加入抗体室温孵育，PBS冲洗，DAB显色，苏木精复染，光镜下观察。用已知的阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为空白对照。全部单克隆抗体SP法试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 结果判断

结果由两位病理医生独立观察每张免疫组化切片后做出判断。CD56、CgA、Syn的阳性表达均为细胞膜和(或)胞浆出现棕黄色颗粒沉积；TTF-1阳性为细胞核出现棕黄色颗粒沉积。阳性表达判断标准见文献[5]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件包进行统计分析，数据间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各指标在SCLC与NSCLC组织中的表达

CD56、CgA、Syn、TTF-1在SCLC组织中的阳性表达率分别为93.5%(58/62)、9.7%(6/62)、87.1%(54/62)、80.6%(50/62)，CD56、Syn、TTF-1为弥漫阳性，CgA多为局灶弱阳性；CD56、CgA、Syn、TTF-1在NSCLC组织中的阳性表达率分别为7.5%(3/40)、0(0/40)、15.0%(6/40)、47.5%(19/40)；TTF-1在NSCLC腺癌组织中阳性表达率为72.7%(16/22)，在鳞癌及大细胞癌组织中的阳性表达率均为16.7%(2/12、1/6)；CD56、Syn、TTF-1在SCLC组织中的阳性表达均显著高于NSCLC(χ2=12.21～74.89，P<0.01)。CD56、CgA、Syn、TTF-1在SCLC活检组织中的阳性表达率为94.1%(32/34)、11.8%(4/34)、88.2%(30/34)、82.4%(28/34)；在手术组织中阳性表达率分别为92.9%(26/28)、7.1%(2/28)、85.7%(24/28)、78.6%(22/28)；CD56、CgA、Syn及TTF-1在SCLC活检组织与手术组织中的阳性表达率比较差异均无显著性(P>0.05)。SCLC组织中，CD56与CgA、Syn与CgA、TTF-1与CgA的阳性表达率比较，差异均有显著性(χ2=63.04～87.32,P<0.01)。

2.2 SCLC组织中各指标表达与临床病理学参数的关系

SCLC组织中CD56、CgA、Syn及TTF-1的表达在不同临床病理学参数之间(如年龄、性别、有无吸烟史、肿瘤的分期与分型及有无淋巴结转移)差异均无显著性(P>0.05)。见表1。

3 讨 论

SCLC的恶性程度高，侵袭能力强，通常在诊断时已经发生转移。由于活检组织挤压较重，通过HE染色进行病理诊断难度较大，因此通过免疫组化法对SCLC进行早期诊断具有重要意义。

CD56是一种神经细胞黏附分子(NCAM)，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞、组织和肿瘤中。近年来研究显示，CD56在SCLC组织中有较高的表达。FARINOLA等[6]报道CD56在SCLC组织及其淋巴结中的阳性表达率为100%(8/8)；KONTOGIANNI等[7]研究20例SCLC活检标本结果显示，该组织中CD56均呈阳性表达，甚至受挤压部分的肿瘤组织中CD56也有较高的表达。Syn、CgA作为传统的神经内分泌的免疫标记物，常用于SCLC及胃肠道类癌的诊断[8]。TTF-1主要表达于甲状腺及肺肿瘤，近年来研究显示，其在SCLC和肺腺癌中有较高表达[4]。HIROSHIMA等[9]研究显示，TTF-1是SCLC的一种敏感而特异的免疫标记物，其阳性表达率为80%～90%。本实验结果显示，CD56、Syn、TTF-1在SCLC中的阳性表达均显著高于NSCLC，而TTF-1在SCLC中的阳性表达与肺腺癌比较差异无显著性。其中CD56、TTF-1在SCLC中的表达率与近年国内外文献大多数报道的结果较一致，Syn与CgA的表达结果与以往报道的结果有差异[10]。

国外有研究将CD56列入神经内分泌肿瘤诊断标记物[6,11]。本实验结果表明，CD56在SCLC组织中有高表达率，进一步证实了CD56对SCLC的诊断价值。作为传统的神经内分泌标志物，本研究中Syn的阳性表达率要比以往文献报道的水平偏高，而CgA的阳性表达率比以往文献报道的水平偏低，但由于Syn、CgA表达的高特异性，应用Syn及CgA对SCLC的协助诊断有帮助。SCLC与低分化肺鳞癌及大细胞癌有时在形态上很难区分，有研究结果表明，TTF-1在SCLC中的表达较高，在肺鳞癌及大细胞癌中的表达较低[4,9]。本实验TTF-1在SCLC中的阳性表达率较高，在肺鳞癌及大细胞癌组织中的表达率均较低，表明TTF-1可以作为区分SCLC与肺鳞癌及大细胞癌的免疫标记物。

表1 SCLC组织中各指标表达与临床病理学参数的关系(例)

鉴于CD56、CgA、Syn及TTF-1在SCLC中的特异性均较高，联合应用上述4项指标进行检测可以有效鉴别SCLC与NSCLC，进一步提高SCLC诊断的准确率。SCLC组织中CD56、CgA、Syn、TTF-1的表达在活检组织中与手术切除组织中差异无统计学意义，提示可以通过活检组织中上述4项指标的联合检测对SCLC病人进行诊断；它们在不同的临床病理学参数之间(如年龄、性别、有无吸烟史、肿瘤的分期与分型及有无淋巴结转移)的差异也无统计学意义，即各指标的表达不受病理学参数的影响，在肿瘤早期无淋巴结转移的时候就可以检测到，表达较稳定。

综上所述，CD56、CgA、Syn及TTF-1对SCLC的诊断以及鉴别诊断有重要作用，它们具有稳定表达及特异性高的特点，联合应用有助于对SCLC进行诊断、早期诊断，从而进行早期治疗。

[1] SPIRA A, ETTINGER D S. Multidisciplinary management of lung cancer[J]. N Engl J Med, 2004,350(4):379-392.

[2] 云径平,向锦,侯景辉,等. CD56在小细胞组织中的表达及其对诊断中应用[J]. 癌症, 2005,24(9):1140-1143.

[3] BEASLEY M B. Immunohistochemistry of pulmonary and pleural neoplasia[J]. Arch Pathol Lab Med, 2008,132(7):1062-1072.

[4] FUJITA J, OHTSUKI Y, BANDOH S, et al. Expression of thyroid transcription factor-1 in 16 human lung cancer cell lines[J]. Lung Cancer, 2003,39:31-36.

[5] 赵海滨,杨树东,周志华,等. 肾原发性神经内分泌癌临床病理观察[J]. 诊断病理学杂志, 2011,18(2):121-123.

[6] FARINOLA M A, WEIR E G, ALI S Z. CD56 expression of neuroendocrine neoplasms on immunophenotyping by flow cytometry: a novel diagnostic approach to fine-needle aspiration biopsy[J]. Cancer, 2003,99(4):240-246.

[7] KONTOGIANNI K, NICHOLSON A G, BUTCHER D, et al. CD56 a useful tool for lung carcinomas on biopsies with extensive crush artifact [J]. Clin Pathol, 2005,58,(9):978-980.

[8] 林东亮,李玉军,赵洁,等. Secretagogin在胃肠道类癌诊断中的作用[J]. 青岛大学医学院学报, 2010,46(3):258-262.

[9] HIROSHIMA K, IYODA A, SHIDA T, et al. Distinction of pulmonary large cell neuroendocrine carcinoma from small cell lung carcinoma: a morphological, immunohistochemical, and molecular analysis[J]. Mod Pathol, 2006,19:1358-1368.

[10] NICHOLSON S A, BEASLEY M B, BRAMBILLA E, et al. Small cell lung carcinoma (SCLC): a clinicopathologic study of 100 cases with surgical specimens[J]. Am J Surg Pathol, 2002,26(9):1184-1197.

[11] YAMAMOTO J, OHSHIMA K, IKEDA S, et al. Primary esophageal small cell carcinoma with concomitant invasive squamous cell carcinoma or carcinoma in situ[J]. Hum Pathol, 2003,34(11):1108-1115.