牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制及其机制的探讨①

孟宇，吕俊，齐世美

（皖南医学院生物化学教研室，安徽 芜湖 241001 E－mail：mengyu60＠163.com）

多糖作为一种具有特殊生物学活性功能的物质，日益受到重视，其在抗肿瘤、抗病毒、增加免疫等方面具有一定的功能。前期实验已经证实牛蒡多糖对正常小鼠、环磷酰胺致免疫低下小鼠和S180肉瘤小鼠的免疫系统均有增强作用，不同剂量组的抑瘤率均明显提高，同时能提高荷瘤小鼠巨噬细胞产生NO 及吞噬活性［1］，但是牛蒡多糖对K562细胞的抑制作用及机制未见报道。本课题旨在前期实验研究的基础上，应用MTT、RT－PCR 法检测相关指标，初步探索牛蒡多糖是否对K562癌细胞体外增殖具有抑制作用，是否影响凋亡相关基因BCL－2、Bax mRNA 的表达，从而探讨牛蒡多糖对K562细胞抑制作用的可能机制，寻找一种新的能够诱导K562癌细胞凋亡的多糖，作为治疗白血病的天然无毒副作用的药物，为白血病治疗药物的研发提供必要依据。

1 材料和方法

1.1 材料与仪器 RPMI－1640培养基 （南京凯基生物）；胰蛋白酶 （合肥志宏）；MTT （合肥志宏生物）；K562细胞株（引自皖南医学院中心实验室）；RNA 提取试剂盒 （合肥志宏）；逆转录一聚合酶联反应 （RT－PCR）试剂盒 （合肥志宏）。CO2培养箱 （Excella Eco－170）；酶标仪 （EPOCH）；倒置显微镜 （OLYMPUS）。

1.2 方法

1.2.1 MTT法检测细胞抑制率 取对数生长期的K562细胞，置于24孔板，于37℃、5%CO2培养箱中培养，每孔加入100μl相应的含药培养基，设置阴性组，在CO2培养箱中培养24h、48h后。每孔加入20μl MTT （5mg／ml），培养箱继续培养4h，弃去培养基，每孔加入100μl DMSO 溶解，摇床10 min轻轻混匀；λ＝490nm，测出OD值，计算抑制率：抑制率＝（1－试验组A490均值／空白对照组A490均值）×100%。

1.2.2 RT－PCR 测定BCL－2、Bax mRNA 的表达 取对数生长期的细胞以2×105／ml均匀接种细胞于6孔板，每孔2 ml。……