时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏筛查中的应用价值

邓国生，何 芳，李丽丽

（广西玉林市妇幼保健院，广西 玉林537000）

为了探讨时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏（唐氏综合征、21－三体综合征）筛查中的应用价值，使用芬兰PE公司生产的1420时间分辨荧光测定仪Wallac MultiCalc行唐氏筛查，筛查阳性者部分进行羊水产前诊断胎儿染色体核型，统计分析如下。

1 对象与方法

1.1 对象

2012年1月至2012年11月30日玉林市妇幼保健院围产保健门诊及外院接受唐氏筛查孕妇，年龄20－34岁，孕周15－20＋6周单胎，羊水产前诊断羊膜腔穿刺术孕周18－22＋6周，病人来源于地级玉林市城郊，以及辖区陆川、博白、容县、北流和兴业等县市区。

1.2 仪器与试剂

唐氏筛查使用芬兰PE公司生产1420时间分辨荧光测定仪 Wallac MultiCalc、微孔板洗板机－DELFIA Platewash、自动振荡器－DELFIA Plateshake、hAFP／Free hCGβ二联筛查检测试剂盒及LifeCycle 3.0产前筛查风险评估软件；产前诊断使用美国Forma3111CO2培养箱，美国CHANG MEDIUM○RD和德国Cytogen培养基。

1.3 唐氏筛查方法

抽取孕妇空腹静脉血2－3ml，自然凝固后，离心分离血清－20℃冰箱保存，实验室设专人1周集中检测1次，严格按说明书程序进行孕妇血清中hAFP／Free hCGβ浓度检测，测定结果结合孕妇年龄、体重、有无糖尿病及吸烟史等参数，采用公司风险评估软件，将检测结果与相应年龄和孕周实验项目检测结果的中位数比较，计算得出中位数倍数（MoM值），根据孕妇信息进行风险校正，最后得出风险值，21－三体综合征高风险切割值为1∶270，≥1∶270为21－三体综合征高风险。开放性神经管畸形正常参考值（AFPMoM＜2.5）。唐氏先天愚型高风险孕妇建议做羊水产前诊断，开放性神经管畸形（NTD）高风险孕妇建议B超诊断。对唐氏先天愚型高风险孕妇进行遗传咨询，其中511例高风险孕妇接受羊水产前诊断胎儿染色体核型分析。

1.4 羊水产前诊断胎儿染色体核型方法

在B超引导下穿刺针经母腹抽取羊水20ml送检，培养瓶法染色体分析（320条带），G显带。即抽取羊水20ml分2支15ml离心管，1 500rpm离心10分钟，在生物安全柜无菌操作，弃上清液后分别加入5ml不同厂家培养基用吸管打匀并分别放入2个培养瓶于2个独立CO2培养箱中培养，5天后细胞生长良好，即可加秋水仙素3小时收获、处理、制片及G显带。G显带分析（320条带），计数20个中期分裂相，分析5个核型，异常者加倍分析、计数，染色体核型分析按人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN2009）进行，染色体多态应结合C显带的方法确定其核型。

2 结果

2.1 唐氏筛查状况

唐氏筛查总例数12937例，检出高风险孕妇1087例，筛查阳性率8.40%，其中检出唐氏先天愚型高风险912例，阳性率7.05%；开放性神经管畸形（NTD）高风险175例，阳性率1.36%。

2.2 羊水产前诊断胎儿染色体核型状况

511例唐氏先天愚型高风险孕妇接受羊水产前诊断胎儿染色体检查，胎儿染色体异常核型31例，检出率为6.07%，其中，2例唐氏综合征，胎儿核型为47，XY，＋21和46，XY，der（14；21），＋21；2例罗伯逊易位携带者，胎儿核型为45，XX，der（13；14）（q10；q10）；1例平衡易位，胎儿核型为46，XX，t（7；14）（q31；q11）；4例嵌合体，胎儿核型为46，XY，t（4；7）（q35；q22），r（13）[26]／46，XY，r（13）[24]、47，XYY[25]／46，XY[25]、47，XX，＋7[2]／46，XX[51]、47，XY，＋9[2]／46，XY[48]；2例 Y 倒位，胎儿核型为46，X，inv（Y）（p11q11）；20例染色体多态，胎儿核型为46，X，Yqh＋1例、46，XX，1qh＋1例、46，XX，9qh＋ 2例、46，XX，inv（9）（p11q13）6例、46，XY，inv（9）（p11q13）4例、46，XX，14pss 1例、46，XX，15pstk＋1例、46，XX，21pstk＋ 2例、46，XX，22pstk＋1例、46，XX，22p＋1例。

3 讨论

唐氏综合征是人类常见的常染色体异常疾病，主要的发病机制是卵母细胞减数分裂不分离，95%的病人受精卵中21号染色体额外复制，还有4%的罗伯逊易位和1%的嵌合现象[1]，本调查表明，2例唐氏综合征，胎儿核型为47，XY，＋21和46，XY，der（14；21），＋21。张宏红等[2]报道，贵州省唐氏综合征222例患者嵌合型占2.25%、易位型占4.05%、单纯型占92.35%，合并其他染色体异常者占1.35%。

唐氏综合征患儿目前无改变染色体异常的有效方法，只能通过筛查找到高风险对象进行产前诊断明确胎儿染色体状况，对染色体异常建议终止妊娠达到减少出生缺陷、提高出生人口素质的目的[3]，在我国，在分娩前对畸形胎儿进行终止妊娠是合法的。产前诊断是一种创伤高风险医疗行为，存在感染，流产等并发症的可能，因此，不能替代筛查对所有的孕妇进行产前诊断。

本调查表明，采用1420时间分辨荧光测定仪Wallac MultiCalc行唐氏筛查，可以评估胎儿唐氏综合征患病风险，可有效降低有创产前检查胎儿染色体。时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏筛查的应用效果，根据杨延东等[4]报道，采用时间分辨荧光免疫检测技术在孕中期进行唐氏综合征筛查，共筛查767例，筛查阳性36例，阳性率为4.69%，其中有32例孕妇自愿接受了产前诊断，有4例证实为唐氏综合征，有筛查阳性中，有12.50%为唐氏综合征胎儿。根据杨延东等[5]报道，孕中期时间分辨荧光法检测血清标志物1976例，唐氏综合征患病高风险94例，高风险率为4.76%。根据徐聚春等[6]报道，对8864例孕妇采用时间分辨荧光法进行唐氏筛查，唐筛阳性430例，阳性率为4.8%，唐筛阳性中行羊水穿刺365例，21－三体综合征8例，占唐筛阳性的2.2%。根据王丹等[7]报道，应用时间分辨荧光免疫法对3657例孕中期（14～20＋6周）妇女进行唐氏筛查，唐筛阳性212例，阳性率为5.80%，其中，68例接受产前诊断，确诊唐氏综合征3例，唐氏综合征检出率占唐筛阳性的4.41%。大量文献显示，时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏筛查中有较好筛查效果，可以评估胎儿唐氏综合征患病风险，有效降低有创产前检查胎儿染色体。

[1]彭 薇，王春枝，何玺玉，等.唐氏综合征筛查研究进展[J].中国优生与遗传杂志，2012，20（7）：4.

[2]张宏红，周从容，吴小平，等.贵州省222例唐氏综合征患者的细胞遗传学分析[J].中国妇幼保健，2011，26（24）：3766.

[3]罗 艳，符可鹏.唐氏综合征发病状况调查分析[J].中国妇幼保健，2009，24（17）：2404.

[4]蒋 滢，曹 利，向时庆，等.唐氏综合征母体血清时间分辨荧光免疫筛查和产前诊断分析[J].重庆医学，2009，38（1）：70.

[5]杨延冬，王 莉，姜秀清，等.孕中期时间分辨荧光法检测血清标志物在产前筛查中的应用[J].现代医药卫生，2010，26（14）：2085.

[6]徐聚春，曹 利，胡 华，等.8864例孕妇唐氏综合征筛查与羊水穿刺结果分析[J].中国优生与遗传杂志，2012，20（1）：30.

[7]王 丹，刘 丽，宋朝晖，等.3657例孕中期唐氏筛查及产前诊断的临床价值分析[J].中国产前诊断杂志（电子版），2010，2（3）：17.