铜藻总萜提取物抗抑郁活性及作用机制

赵东海 李梦璐 袁 臻 罗维芸 顾丽霞

(吉林医药学院病理学教研室，吉林 吉林 132013)

铜藻是我国浅海植被的珍贵物种，主要分布于辽宁、浙江、福建、广东等地，是藻胶工业的优质饵料，因富含有益的生物要素而被广泛应用到医药、食品、饲料和有机肥料中〔1〕。褐藻中含有大量的萜类化合物，主要有倍半萜和二萜类化合物〔2～4〕。有研究报道，从银杏中分得的萜类化合物能够显著增加大鼠纹状体和边缘系统多巴胺的含量，对多巴胺(DA)代谢有一定的抑制作用，表明萜类化合物具有抗抑郁活性〔5，6〕。铜藻属于褐藻类，具有丰富的资源优势，但目前有关铜藻总萜提取物的抗抑郁作用研究尚未见报道。本文对总萜提取物抗抑郁活性进行研究，为铜藻抗抑郁中药研究提供实验基础和理论依据。

1 资料与方法

1.1材料 雄性Balb/c小鼠(18～22 g)，购自浙江省实验动物中心。自然昼夜光照，自由饮水、摄食，适应性喂养5 d后进行实验。 铜藻：采集于舟山市海域。盐酸氟西汀(美国Lilly公司)用前用2%羧甲基纤维素钠水溶液配制成1 g/L，备用；乙醇、羧甲基纤维素钠等为分析纯。

1.2检测指标及方法

1.2.1铜藻总萜提取物的制备 铜藻总萜提取物由浙江海洋学院食品与药学学院提供，制备工艺参照文献〔7～11〕。将干燥的铜藻粉碎过80目筛，8倍量90%乙醇浸泡2 h后，超声波辅助萃取30 min，80℃水浴提取2 h，连续提取3次，合并提取液，回收溶剂至浸膏，过滤，收集滤液。连续提取3次，合并滤液，蒸发至浸膏状。总萜提取物浸膏状物质用2%羧甲基纤维素钠溶液分别配制一定的浓度，备用。

1.2.2实验动物分组及药品处理 取雄性小鼠100只，实验室适应性饲养3 d，随机抽取50只分别纳入空白组、盐酸氟西汀、铜藻总萜提取物低、中、高剂量组(每组10只)。盐酸氟西汀剂量为30 mg/kg；铜藻总萜提取物低、中、高剂量分别为100、200、400 mg/kg；空白组灌服同体积的2%羧甲基纤维素钠水溶液，连续灌胃7 d，1次/d。于末次给药后1 h进行小鼠强迫游泳、悬尾实验。实验结束后处死小鼠，分离小鼠下丘脑利用高效液相-电化学法(HPLC-ECD)检测下丘脑5-羟色胺(HT)水平。

1.2.3小鼠强迫游泳实验 将小鼠放入XSC-小鼠恒温游泳仪内(水深10 cm、直径34 cm的桶内，水温25℃±2℃)，观察6 min内小鼠游泳情况，统计小鼠后4 min内游泳累积不动时间(即小鼠停止挣扎或小鼠呈漂浮状态、四肢有轻微动作以保持头部在水面)〔12〕。

1.2.4小鼠悬尾实验 距小鼠尾尖部约1 cm处用胶布贴于悬尾箱(30 cm×30 cm×25 cm)支架上，使小鼠呈倒挂状态，其头部离箱底约5 cm，1次悬挂2只小鼠，中间用隔板隔开。悬挂时间为6 min，统计小鼠后4 min内悬尾累积不动时间(即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)〔13〕。

1.2.5小鼠自主活动实验 于给药前和末次给药后1 h检测。采用XZC-4小鼠自主活动测定仪，将小鼠放入测定仪适应5 min后开始测定，以10 min 内给药前后的活动次数之差为指标，比较各组小鼠自主活动强度。

1.2.6HPLC-ECD测定小鼠小脑(5-HT)水平 每100 mg 脑组织中加入200 μl 冰冷HClO4(0.4 mol/L)，冰浴超声匀浆，避光4℃静置60 min，离心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，加入上清半量体积的混合液(柠檬酸钾0.2 mol/L，K2HPO40.3 mol/L和 EDTA 0.2 mol/L)，震荡混匀10 min，避光4℃静置60 min，再次离心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，HPLC-ECD测定5-HT水平。

2 结 果

2.1铜藻总萜提取物对小鼠强迫游泳不动时间的影响 与空白组〔(147.6±14.8)s〕相对比，铜藻总萜类提取物中、高剂量(400 mg/kg)能降低小鼠强迫游泳的不动时间〔(118.3±10.7)、(109.4±9.9)s〕(P<0.05)。低剂量组〔(135.7±13.4)s〕未显示降低；盐酸氟西汀组小鼠不动时间〔(78.5±4.9)s〕明显缩短(P<0.001)。

2.2铜藻总萜提取物对小鼠悬尾不动时间的影响 与空白组〔(135.7±15.2)s〕比较，铜藻总萜提取物高、中、低剂量均能够降低小鼠悬尾的不动时间〔(98.7±8.6)、(107.8±9.4)、(109.4±10.4)s〕，并且随着剂量增大，不动时间减少越明显，其中高剂量组，小鼠悬尾不动时间减少最明显。而对照药盐酸氟西汀组小鼠不动时间〔(65.2±5.6)s〕明显缩短(P<0.001)。

2.3铜藻总萜提取物对小鼠自主活动的影响 与空白组〔(28±64)次〕比较，盐酸氟西汀组小鼠自主活动次数〔(123±59)次〕显著减少(P<0.001)，铜藻总萜提取物高剂量组小鼠自主活动次数〔(114±86)次〕明显减少(P<0.01)，低中剂量组〔(46±74)、(88±39)次〕略减少(P<0.05)。

2.4铜藻总萜提取物对小鼠小脑5-HT含量的影响 与空白组〔(84±11.28)ng/g〕相比，铜藻总萜提取物高、中、低剂量组均能提高小鼠小脑5-HT水平〔(127±4.23)、(112±6.34)、(96±78.52)ng/g〕，并呈剂量依赖关系，其中铜藻总萜提取物中、高剂量组作用更显著(P<0.01)，盐酸氟西汀组也能明显提高5-HT水平〔(158±9.65)ng/g〕(P<0.001)。

3 讨 论

小鼠强迫游泳实验和悬尾实验〔12～14〕模型提供了一个无法回避的压迫环境，实验中小鼠表现出来的不动状态，反映了一种被称之为“行为绝望和扭曲”或“对强压环境适应的失败”状态〔15〕。这两种行为绝望模型对绝大多数抗抑郁药敏感，被广泛用于筛选和观察抗抑郁药物的。动物在强迫这一应激条件下，挣扎后出现绝望表现即不动状态，而抗抑郁剂可以减少动物的不动时间，提高对应激的耐受性。随着竞争的加剧，抑郁症发生与患病频率已经变得越来越高。而抑郁症的病理生理机制迄今不明确，病理改变涉及神经、内分泌、免疫等多个系统，是遗传因素和环境因素相互作用的结果。因此，从天然植物药中寻找与研制具有良好抗抑郁作用的药物已越来越受到学术界的关注。

本实验结果说明铜藻中总二萜能够增强实验动物的应激耐受性，减少绝望动物的不动时间，具有明显的抗小鼠实验性抑郁作用。5-HT是脑内重要的神经递质，参与情感、睡眠、记忆及食欲等代谢活动的调节〔16〕。本实验结果发现铜藻总萜提取物各剂量组均能提高小鼠小脑5-HT水平，并呈剂量依赖关系。初步证实铜藻总萜提取物可能通过提高脑内5-HT水平而发挥抗抑郁作用。

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