吴茱萸碱对高尿酸血症动物模型的影响

陶兆燕，程媛，唐熠，谭亿民，李涓

·药理毒理·

吴茱萸碱对高尿酸血症动物模型的影响

陶兆燕1，程媛2，唐熠2，谭亿民2，李涓2

目的：通过建立大鼠及鸡高尿酸血症动物模型，观察吴茱萸碱的降血尿酸作用。 方法：将大鼠灌胃次黄嘌呤(100 mg．kg-1)，再皮下注射氧嗪酸钾盐(20 mg．kg-1)致尿酸增高模型，观察吴茱萸碱的降血尿酸作用；通过喂食鸡高蛋白高钙饲料建立鸡高尿酸血症模型，观察吴茱萸碱在给药7 d和14 d后的降血尿酸作用。结果：与模型组比较，吴茱萸碱高低剂量组均有降低大鼠血清尿酸值的作用，且低剂量组降血尿酸作用效果显著；在给药后第7 d和第14 d，与模型组比较，吴茱萸碱低剂量组能显著降低鸡高尿酸血症动物模型的血清尿酸值。结论：吴茱萸碱具有一定的降血尿酸作用，为临床进一步研究吴茱萸碱对高尿酸血症的治疗作用提供了实验依据。

]吴茱萸碱；高尿酸血症；降血尿酸

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实。始载于《神农本草经》，味辛、苦，性热；具有散寒止痛，降逆止呕，助阳止泄之功；其主要活性成分为吴茱萸碱。药理实验研究表明吴茱萸碱具有抗炎镇痛、促进消化、保护心血管、强心、降压、抗菌、减肥、降尿酸、收缩子宫及抑制睾酮分泌等作用[1～2]。高尿酸血症是长期嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少引起血尿酸水平增高及尿酸盐在组织沉积所致的疾病。通过前期实验研究表明吴茱萸碱有明显降血尿酸的作用[3]，为了进一步深入研究其降血尿酸作用，本次实验我们采用不同的高尿酸血症动物模型对其进行研究，以期为以后临床应用提供更全面的实验参考和理论依据。

1 材料与仪器

1.1 药物

吴茱萸碱，西安冠宇生物技术有限公司生产，批号Ev120418，纯度98.26%。别嘌醇片，重庆科瑞制药（集团）有限公司生产，批号512002。

1.2 动物

SD大鼠，雄性，体重200～250g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，许可证号为SCXK(川)2008-11；罗曼蛋鸡，体重450～550 g，由成都正大畜禽有限公司提供。常规饲料由成都市新津希望饲料厂提供；造模饲料由四川省实验动物专委会养殖场提供，其中造模饲料(底料为常规饲料，补充鱼粉、骨粉)蛋白质含量大于20%、含钙量大于4%。

1.3 试剂

氧嗪酸钾，Sigma-Aldrich 公司生产，批号STBC1486V；次黄嘌呤，Sigma -Aldrich公司生产，批号037K06854；尿酸测定试剂盒，四川迈克生物科技股份有限公司生产，批号0812061、0113011。

1.4 仪器

LXJ-Ⅱ型离心沉淀机，上海医用分析仪器厂；电热恒温水温箱，上海医疗器械七厂；BASIC 70VB 0370型半自动生化分析仪，法国西克曼公司；R180D型赛多利斯电子分析天平，d=0.01mg，德国Sartorius公司；T-l000型电子天平，d=0.1g，美国双杰兄弟(集团)有限公司。

2 方法

2.1 大鼠降血尿酸实验[4～6]

选择体重为200～250 g的健康雄性SD大鼠50只，按体重随机分为5组，即空白对照组，模型组，别嘌醇组，吴茱萸碱高、低剂量组。空白对照组和模型组灌胃给予等容量的0.5% CMC-Na溶液，其余各组动物按表1所列剂量分别灌胃给予相应药物，给药容量均为1 mL．100g-1，每天给药1次，连续7 d。末次给药30 min后，模型组和各药物组进行高尿酸血症的造模，先灌胃给予剂量为100 mg．kg-1次黄嘌呤，给药容量为1 mL．100g-1，再皮下注射剂量为20 mg．kg-1氧嗪酸钾盐，给药容量为0.5 mL．100g-1。空白对照组同法操作给予等容量的0.5%CMC-Na溶液和等容量的生理盐水。造模后3 h从大鼠眼眶静脉丛取血，3000 rpm离心10 min，分离血清，用尿酸测定试剂盒规定的检测方法测定血清尿酸值。

2.2 鸡高尿酸血症实验[7～10]

2.2.1 模型制作 根据预试结果，选取100日龄罗曼蛋鸡50只，在实验室适应性喂养5d后，随机抓取10只作为空白对照组，并给予常规饲料，自由饮水。其余40只每天每只给予高蛋白高钙饲料进行造模，并且每只鸡每日控制进水量100 mL，单笼喂养。于造模第14 d抽取鸡翅静脉血，取血前动物禁食不禁水8 h，3000 rpm离心10 min，分离血清，按试尿酸测定试剂盒规定的检测方法测定血清尿酸值，若血清尿酸值与空白对照组比较显著升高，且差异具有显著性，则说明造模成功。

2.2.2 分组给药 根据血清尿酸值将成模鸡随机分为4组，即模型组，别嘌醇组，吴茱萸碱高、低剂量组。空白对照组，给予常规饲料，自由饮水。模型组继续给予高蛋白高钙饲料，并控制进水量每只鸡每日100 mL。其余组除每只鸡每天给予高蛋白高钙饲料和控制进水量100 mL外，并按表2剂量给予相应药物，每日灌胃1次，连续给药14 d。空白对照组和模型组同法操作给予等容量的0.5%CMC-Na溶液。在给药后第7 d、14 d分别称体重1次，于鸡翅静脉取血，取血前动物禁食不禁水8 h，3000 rpm离心10 min，分离血清，按试剂盒规定检测方法测定血清尿酸值。

2.2.3 取血方法 将鸡翅展开暴露翼根静脉，7号针头以45°角刺破血管，1.5 mL离心管收集流出的血液，完毕后压迫止血。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 对大鼠血清尿酸值的影响

结果显示，与空白对照组比较，模型组血清尿酸值显著升高。与模型组比较，吴茱萸碱高、低剂量组对灌胃给予次黄嘌呤再皮下注射氧嗪酸钾盐致血清尿酸值增高均有降低作用，且低剂量组降血尿酸作用效果显著。由此表明吴茱萸碱具有降血尿酸的作用，结果见表1。

表1 吴茱萸碱对大鼠血清尿酸值的影响(±s，n = 10)

表1 吴茱萸碱对大鼠血清尿酸值的影响(±s，n = 10)

注：与模型组比较* P＜0.05；** P＜0.01

组别 剂量（mg．kg-1） 血清尿酸值（μmol．L-1）空白对组 － 87.80±11.66**模型组 － 165.70±39.97吴茱萸碱低剂量组 9 111.70±19.98**吴茱萸碱高剂量组 18 120.90±30.82*别嘌醇组 18 99.40±11.73**

3.2 对鸡血清尿酸值的影响

结果显示，与空白对照组比较，模型组血清尿酸值在给药后第7 d和第14 d均明显升高，且差异具有显著性，说明该造模方法所建立的高尿酸血症模型成立。在给药后第7 d和第14 d，与模型组比较，吴茱萸碱低剂量组血清尿酸值显著下降，且差异具有显著性，由此说明吴茱萸碱确实具有一定的降血尿酸作用，结果见表2。

表2 吴茱萸碱对鸡血清尿酸值的影响(±s，n = 10)

表2 吴茱萸碱对鸡血清尿酸值的影响(±s，n = 10)

注：与模型组比较** P＜0.01

组别 剂量（mg．kg-1） 血清尿酸值（μ mol．L-1）给药7 d 给药14 d空白组 - 111.90±22.03** 170.90±28.52**模型组 - 323.00±64.29 370.50±56.96吴茱萸碱低剂量组 5 204.00±27.41** 226.50±33.41**吴茱萸碱高剂量组 10 257.10±103.02 338.40±78.21别嘌醇组 15 147.10±29.29** 172.00±25.12**

4 讨论

吴茱萸为传统中药，具有抗炎镇痛、抗血小板聚集、抑菌、促进消化、降压、保护心血管等作用[11]。吴茱萸碱是吴茱萸中含有的一种色胺吲哚类生物碱，它具有抗炎镇痛、抗肿瘤、强心、增强机体免疫力、调节体温等作用，它的药理作用近些年来越来越受到科研人员的关注。痛风是嘌呤代谢障碍引起的代谢性疾病，其临床表现主要为高尿酸血症、反复发作的急性、慢性关节炎、痛风石沉积、关节畸形和组织损伤等。高尿酸血症是痛风的主要生化基础，痛风必然伴有高尿酸血症。

近年来，随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，高尿酸血症及痛风的发病率同高血脂、高血压、糖尿病一样在逐年上升，且高尿酸血症及痛风与肥胖、高血压、冠心病、胰岛素抵抗的发生等密切相关[12]，这使得人们对高尿酸血症及痛风产生了更多的关注，而中医药在防治痛风及高血尿酸方面有着明显的优势。动物模型作为研究疾病发病机制和药理药效的一种方法在科学发展中也有着重要的作用，从现有对高尿酸血症动物模型的研究来看，目前还没有公认的高尿酸血症动物模型[13]。因此构建一个科学合理、持续稳定的高尿酸血症动物模型和为治疗痛风及高尿酸血症提供安全有效稳定的中药制剂尤为重要。

从本文大鼠降血尿酸实验和鸡高尿酸血症实验结果我们可以看出，吴茱萸碱具有明显降血尿酸的作用。从表1吴茱萸碱对大鼠血清尿酸值的影响实验结果显示，与模型组比较，吴茱萸碱高低剂量组均有降血尿酸的作用，且低剂量组降血尿酸作用效果显著。从表2吴茱萸碱对鸡血清尿酸值的影响结果显示，吴茱萸碱低剂量组有显著降血尿酸的作用。本实验通过不同的实验方法及实验动物建立的高尿酸血症模型，均表明吴茱萸碱具有降血尿酸的作用。此外，通过本实验的研究也为进一步研究吴茱萸碱降血尿酸的作用机制及其临床应用提供了实验参考，同时也为临床开发治疗痛风病新药提供了理论依据。

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（责任编辑：陈思敏）

Effect of evodiamine on the animal model of Hyperuricemia

/TAO Zhao-yan1, CHENG Yuan2, TANG Yi2, TAN Yi-ming2,LI Juan2//(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China;2.Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China )

Objective: Through the establishment animal model of hyperuricemia in rats and chickens to investigate the effects of evodiamine in reducing serum uric acid. Method: The model of hyperuricemia rat was established by intragastric administration of hypoxanthine (100mg．kg-1) frstly and then subcutaneous injection of oxygen hydrochloride acid potassium salt (20mg．kg-1), and the effects of Evodiamine in reducing serum uric acid was investigated. The chicken model of hyperuricemia as established through feeding chicken high protein and high calcium, and the effects of evodiamine in reducing serum uric acid after dosing 7d and 14d were investigated. Result: Compared with the model group, the high and low dosage groups of evodiamine had effect of reducing serum uric acid values in rats, while the low dose group could signifcantly reduced serum uric acid. being administered, 7d and 14d after, compared with the model group, the low dose group of evodiamine could signifcantly reduce the serum uric acid values of hyperuricemia chicken. Conclusion: Evodiamine has a certain role in reducing blood uric acid and provides an experimental basis for the further study on clinical therapeutic effects of evodiamine on hyperuricemia.

Evodiamine；hyperuricemia; reducing serum uric acid

R 285.5

A

1674-926X(2014)02-020-03

四川省科技厅科技基金（编号：2012G032）

1.成都中医药大学，四川 成都 610075；

2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072

陶兆燕（1987-），女，四川泸州人，在读硕士研究生，主要从事中药药效与毒理研究

Tel:13551079749 Email:taozhaoyan@126.com

李涓（1963-），女，重庆人，教授，主要从事药理学、中药药理学研究以及新药的开发研究

Tel:13668162880 Email:Li062@126.com

2013-07-26