呼吸道病毒分离培养检测技术的研究进展

蒋荷萍(综述)，蒋永林(审校)

(宜兴市第二人民医院检验科，江苏 宜兴 214221)

急性呼吸道感染可引起多种临床疾病，每年造成大量婴幼儿及儿童的死亡[1]，同时也给社会造成了比较严重的经济负担[2]。据统计，70%～80%的上呼吸道感染是由病毒引起的，至少有7个科、10多类，共239个型别的病毒可引起急性呼吸道感染[3-4]。由于呼吸道病毒所引发疾病的临床症状比较相近，难以区分从而进行准确诊治。因此，准确而有效的呼吸道病毒诊断方法对呼吸道疾病的控制至关重要。传统的病毒分离培养法一直被誉为病毒检测的“金标准”，但其一直因耗时长、耗费人力且灵敏度差而应用越来越少[5]。近年来，传统的病毒分离培养也有了很多新的发展及改进。该文就呼吸道相关的病毒培养发展进行综述，总结病毒培养中的新方法。

1 传统方法

自1913年牛痘病毒被首次使用细胞培养的方法培养出来至今已有100年的历史，病毒分离培养法一直被誉为病毒鉴定的“金标准”[6]。方法发展之初，实验室一般使用自制培养液及长颈瓶或试管，现各样培养液均已有售。呼吸道病毒培养常用的培养细胞有人肺癌细胞(A549)、貂肺上皮细胞(Mv1Lu)、马丁达比犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney，MDCK)。根据不同的样本，不同的病毒培养时间有所不同，一般从数日到2周不等。经典的培养分离鉴定通过观察细胞病毒效应(cytopathic effect,CPE)来确认病毒的生长情况。除个别病毒外，大多数病毒培养中，CPE的出现一般需要5～10 d，而且不易观察。因此,呼吸道病毒(如流感病毒，副流感病毒等)多使用血细胞凝集试验及血凝集抑制试验来进行检测，利用此类病毒在被其感染的细胞上表达一种可使红细胞凝集的蛋白[7]。……