“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合对制川乌镇痛作用的影响*

赖晓艺，庄朋伟，卢志强，李丽娟，张腾，王萍，贾佳明，张艳军

（1.天津中医药大学中药学院，天津 300193；2.天津市中药药理重点实验室，天津 300193）

“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合对制川乌镇痛作用的影响*

赖晓艺1，2，庄朋伟1，2，卢志强1，2，李丽娟1，2，张腾1，2，王萍1，2，贾佳明1，2，张艳军1，2

（1.天津中医药大学中药学院，天津 300193；2.天津市中药药理重点实验室，天津 300193）

[目的]考察“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合对制川乌镇痛效果的影响。[方法]采用辐射热刺激甩尾法检测给药前及给药后不同时间点小鼠的痛阈值，明确“半蒌贝蔹及攻乌”各单味药的镇痛效果；在此基础上，将制川乌与各单药以1∶1配伍，考察反药组合对制川乌镇痛效果的影响。[结果]制川乌在含生药4 g/kg剂量下，15 min时镇痛效果最佳，与给药前相比差异有统计学意义；法半夏、瓜蒌、白及单独使用有一定的镇痛作用，与给药前相比差异有统计学意义，但起效时间晚于制川乌；川贝母、白蔹镇痛作用与给药前相比差异无统计学意义；法半夏、川贝母、白及与制川乌配伍后可使制川乌的镇痛起效时间延后；瓜蒌与制川乌配伍使镇痛作用起效时间提前，并可持续一定时间（约30 min）；白蔹与制川乌配伍后可显著降低制川乌的镇痛效果。[结论]降低乌头的镇痛作用或延迟起效时间可能是“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合相反的具体表现之一。

制川乌；配伍；甩尾法；镇痛

川乌为毛茛科植物乌头（Aconitum Carmichaeli Debx．）的干燥母根，味苦、辛，大热，有大毒，善祛风除湿、温经散寒、行瘀止痛，广泛用于风湿麻痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒病作痛等症[1]。传统中医理论认为川乌不可以与半夏、瓜蒌、贝母、白蔹、白及同用[2]，认为反药组合使用可能增加川乌的毒性或是降低川乌的药效[3]，但目前关于减效的说法尚缺乏系统的研究。因此，对“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合对制川乌镇痛作用的影响进行了研究，现报道如下。

1 实验材料

1.1 药物的制备将药材粉碎成粗颗粒，称取一定量的制川乌（四川江油），法半夏（江苏泰州），瓜蒌（江苏洪泽），川贝母（四川康定），白蔹（安徽六安），白及（贵州凯里），制川乌与各单药1∶1配伍（上述各药经本校中药鉴定教研室鉴定均符合饮片标准）。蒸馏水浸泡1 h，回流提取2次，第1次为10倍量蒸馏水煎煮1.5h，第2次为8倍量蒸馏水煎煮1.5 h，8层纱布过滤，合并2次滤液，60℃左右减压蒸馏，浓缩至浸膏状，置4℃冰箱保存备用。

1.2 实验仪器XR-YLS-12A型鼠尾光照痛测痛仪（上海欣软信息科技有限公司）。

1.3 实验动物ICR小鼠，SPF级，体质量18～22 g，雌雄各半。购于北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证编号：SCXK（京）2009－0004。

2 实验方法

2.1 分组及剂量ICR小鼠，采用分层随机分组方法随机分组，每组10只，雌雄各半，实验前禁食不禁水12 h。实验分为制川乌低剂量组（含生药0.4g/kg）、制川乌中剂量组（含生药2 g/kg）、制川乌高剂量组（含生药4 g/kg）、法半夏组、制川乌配伍法半夏1∶1组、瓜蒌组、制川乌配伍瓜蒌1∶1组、川贝母组、制川乌配伍川贝母1∶1组、白蔹组、制川乌配伍白蔹1∶1组、白及组、制川乌配伍白及1∶1组。

2.2 给药及检测按照设计的给药剂量对小鼠灌胃给药，给药体积为0.02 mL/g，检测给药前及给药后5、15、30、60、120 min的痛阈值，计算痛阈提高百分率。具体实验方法参照中药药理实验方法学辐射热刺激法略加改进[4]：将小鼠置于自制的圆筒内，使其不能自由活动，鼠尾由筒后的圆孔穿出，让其自由下垂，待动物保持安静后开始实验。测痛时透光漏斗外部紧贴鼠尾下部1/3处，借电子秒表记录从照射开始至出现甩尾时作为痛阈值。实验选择22 V、280 W、16 mm的照射条件，每只小鼠测定2次，取其平均值作为痛阈值[5-7]，且选用5 s左右甩尾的小鼠，小于3 s或大于10 s的小鼠表示反应过敏或迟钝，舍弃不用；给药后，若照射12.5 s仍不甩尾时，即停止照射，以免烫伤，并以12.5 s计。

2.3 统计方法采用SPSS 18.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组内比较采用配对t检验，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 制川乌镇痛作用结果制川乌在含生药0.4g/kg的给药剂量下，给药前后小鼠的痛阈值无显著性变化；在含生药2 g/kg的给药剂量下，镇痛效果在30 min左右可达到最大值，与给药前相比差异有统计学意义；在含生药4 g/kg的给药剂量下，能迅速起效，15 min可达到最大值，与给药前相比差异有统计学意义，与中剂量组比较差异有统计学意义，随后药效逐渐降低，在2 h内镇痛作用逐渐消失，结果见图1、表1。

3.2 制川乌与法半夏配伍镇痛作用结果制川乌与法半夏配伍可显著降低制川乌的镇痛效果，并能延迟制川乌的起效时间，30 min可达到最大值，与给药前比较差异有统计学意义；法半夏在含生药4 g/kg的给药剂量下，30 min时镇痛效果最佳，与给药前相比差异有统计学意义。结果见图2、表2。

3.3 制川乌与瓜蒌配伍镇痛作用结果制川乌与瓜蒌配伍在15 min可显著降低制川乌的镇痛效果，但可使镇痛效果提前达到最大值，5 min时镇痛效果最佳，与给药前相比差异有统计学意义，并持续一段时间（30 min左右）；瓜蒌在含生药4 g/kg的给药剂量下，在30 min时镇痛作用可达最大值，与给药前相比差异有统计学意义。结果见图3、表3。

3.4 制川乌与川贝母配伍镇痛作用结果制川乌与川贝母配伍可延迟制川乌镇痛作用达峰时间，30 min时镇痛效果最佳，与给药前比较差异有统计学意义；川贝母在含生药4 g/kg的给药剂量下，给药后2 h内镇痛作用与给药前相比差异无统计学意义。结果见图4、表4。

3.5 制川乌与白蔹配伍镇痛作用结果制川乌与白蔹配伍在15 min时可显著降低制川乌的镇痛效果；白蔹在含生药4 g/kg的给药剂量下，给药后2 h内镇痛作用与给药前相比差异无统计学意义。结果见图5、表5。

3.6 制川乌与白及配伍镇痛作用结果制川乌与白及配伍后药效达峰时间明显延后，60 min时达到最大值，与给药前相比差异有统计学意义；白及在含生药4 g/kg的给药剂量下，在15～60 min表现出稳定而持久的镇痛作用，与给药前相比差异有统计学意义。结果见图6、表6。

4 讨论

图1 制川乌镇痛作用结果

图2 制川乌与法半夏配伍镇痛作用结果

图3 制川乌与瓜蒌配伍镇痛作用结果

图4 制川乌与川贝母配伍镇痛作用结果

图5 制川乌与白蔹配伍镇痛作用结果

图6 制川乌与白及配伍镇痛作用结果

表1 制川乌镇痛作用结果（±s，n＝10）

表1 制川乌镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；高剂量组与中剂量组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min低剂量0.45.21±0.955.31±1.195.42±0.835.47±1.105.31±1.045.16±1.22中剂量24.98±1.225.68±1.096.03±0.72*6.77±1.30**6.27±1.01*5.23±1.31高剂量45.08±1.676.86±1.21*△8.13±0.51**△△6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09

表2 制川乌与法半夏配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

表2 制川乌与法半夏配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；乌半组与制川乌组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川乌45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09法半夏45.05±1.455.30±1.345.56±2.016.31±1.50*5.35±1.165.20±2.00乌半（1∶1）4∶45.11±1.565.88±0.99Δ6.03±1.85*ΔΔ7.61±1.87**6.39±2.14*5.62±1.36

表3 制川乌与瓜蒌配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

表3 制川乌与瓜蒌配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；乌瓜组与制川乌组比较，ΔP＜0.05。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川乌45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09瓜蒌45.10±2.015.61±0.696.53±1.32*8.72±1.86**6.32±1.64*5.46±2.10乌瓜（1∶1）4∶44.96±1.277.14±1.50**6.84±1.93*Δ6.75±1.47*5.85±1.535.46±1.82

表4 制川乌与川贝母配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

表4 制川乌与川贝母配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；乌贝组与制川乌组比较，ΔΔP＜0.01。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川乌45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09川贝母44.88±1.464.98±1.455.08±1.415.12±1.505.32±2.044.83±1.71乌贝（1∶1）4∶44.93±1.036.11±2.12*5.92±0.96*ΔΔ7.10±1.38**5.47±0.925.37±1.26

表5 制川乌与白蔹配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

表5 制川乌与白蔹配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；乌蔹组与制川乌组比较，ΔP＜0.05。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川乌45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09白蔹44.95±0.635.30±1.935.15±2.055.15±1.305.00±0.914.85±1.50乌蔹（1∶1）4∶45.11±1.226.39±1.74*6.59±1.65*Δ6.29±1.13*5.67±1.525.98±1.64

表6 制川乌与白及配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

表6 制川乌与白及配伍镇痛作用结果（±s，n＝10）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；乌及组与制川乌组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。

组别剂量（含生药g/kg）药前痛阈值（s）给药后痛阈值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川乌45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.1**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09白及44.94±0.795.53±1.447.11±1.93**6.87±1.66**7.01±0.91**5.78±0.73乌及（1∶1）4∶45.21±0.836.20±2.02*6.93±1.64*Δ7.45±1.82**7.87±0.84**ΔΔ5.68±0.86

“半蒌贝蔹及攻乌”属于“十八反”的范畴，“十八反”是中医药界认定的配伍禁忌，并被编成歌诀，广为流传。上至《神农本草经》，下至现在的《中药学》、《方剂学》、《中国药典》等著作都是言之凿凿[8]，然而，其相反的具体表现并不清楚。川乌在治疗风湿痹痛的诸多寒热药中的应用比例较高，疗效也很显著[9]；现代药理研究也证实，川乌具有显著的镇痛作用[10]。经本课题组前期对川乌毒性的考察，制川乌含生药4 g/kg的给药剂量为安全剂量，无毒副作用，实验中为了更好的反映药组合对制川乌镇痛效果的影响，选择该给药剂量。本研究针对川乌镇痛效果，探讨了“半蒌贝蔹及攻乌”反药组合对制川乌镇痛效果的影响，结果表明川乌与各单药配伍后镇痛作用降低或起效时间延迟，与传统“十八反”理论相符。

[1]张琦.十八反“半蒌贝蔹及攻乌”物质基础及毒性研究[D].长春:长春中医药大学,2010.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社，2010:36-37.

[3]肖成荣,陈鹏，王宇光，等.半楼贝蔹及配伍乌头对大鼠肝细胞色素P450酶含量的影响[J].天津中医药,2004, 21(4):311-314.

[4]李仪奎.中药药理实验方法学[M].第2版.上海：上海科学技术出版社,2006：242-243.

[5]卢珑,沈丽，王雪妮，等.紫荆皮、紫金皮、昆明山海棠镇痛作用比较研究[J].天津中医药大学学报,2012，31（3）：163-165.

[6]曾春萍.桃叶鸦葱抗炎镇痛作用的实验研究[J].天津中医药,2010,27（6）：515-516.

[7]高岚，张仲一，张莉，等.薏苡仁汤镇痛消炎作用的实验研究[J].天津中医药大学学报,2005,24(1)：17-19.

[8]王世民,王永吉.对中药“十八反”—“株连”现象的思考[J].湖南中医药大学学报，2007,27(S1):314-315.

[9]彭欣,秦林.附子类配伍防己在痹证中的应用与研究展望[J].光明中医，1997，12(6):33-35.

[10]江苏新医学院.中药大辞典[S].上海:上海科学技术出版社,1986:569-983.

Impact of contrary medicine combination on analgesia effect of processed Aconiti Radix before and after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit,Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae

LAI Xiao-yi1,2,ZHUANG Peng-wei1,2,LU Zhi-qiang1,2,LI Li-juan1,2,ZHANG Teng1,2, WANG Ping1,2,JIA Jia-ming1,2,ZHANG Yan-jun1,2
（1.College of TCM,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China;2.Tianjin Key Laboratory of Pharmacology of Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the impact on analgesia of processed Aconiti Radix analgesia before and after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit,Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae. [Methods]Using the tail-flick method by radiant heat stimulation the pain threshold of the mice was detected at different time before and after oral administration.The analgesic effect of every single herb was cleared.On this basis,the Processed Aconite Radix was combined with every single herb at 1∶1 and then the impact of anti-drug combination on Processed Aconite Radix analgesic effect was detected.[Results]Processed Aconite Radix could significantly increase the pain threshold in mice at 15 min compared with that before administration under the dose of 4 g crude drug/kg;Pinellia,Snakegourd Fruit and Rhizoma Bletillae used alone had some analgesic effect.The difference was significant compared with that before administration,but the onset time was more delayed than Processed Aconite Radix;For Fritillaria,Ampelopsis Japonica Makino in analgesic effect.There was no significant difference compared with that before administration.Pinellia,Fritillaria and Rhizoma Bletillae could delay the onset time of Processed Aconite Radix and Snakegourd Fruit could make the onset time in advanced and sustainable for a certain period of time(about 30 min).Ampelopsis Japonica could significantly reduce the analgesic effect of Processed Aconite Radix.[Conclusion]Reducing the analgesic effect of Aconitum or delaying the onset time may be one of the specific performance of processed Aconite Radix after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit, Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae.

Processed Aconite Radix;compatibility;Tail-Flick method;analgesia

R285.5

A

1673-9043（2014）01-0032-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.11

2013-09-08）

国家重点基础研究发展规划（973计划）（2011CB 505300，2011CB505302）。

赖晓艺（1987-），女，硕士研究生，主要从事中药药理研究。

张艳军，E-mail:zyjsunye@163.com。