计算机辅助精子分析的质量控制措施The quality control measures of computer-aided sperm analysis

蒋召志，郭路生 (吉林医药学院附属医院:.不孕不育实验室；.输血科，吉林 吉林 303)

质量控制和质量保证作为质量管理两个重要环节，是任何实验室检测分析过程中必不可少的[1],是保证实验室内部检验结果的一致性和不同实验室间检验结果的可比性的有力保障。尽管质量保证和质量控制方法于20世纪70年代和80年代即在临床生物化学和血液学等检验医学领域取得很大进展[2-3]，但在男科实验室的应用尚处于起步阶段。

精液分析是评估男性生育力的重要方法，是男科疾病诊断及疗效观察的实验依据[4]，也是辅助生殖技术遴选适应证中重要指标。影响精液常规检查结果的因素有很多，如受检者精液的采集方式、禁欲时间、取精室与实验室的距离、环境温度、实验室条件、检验人员的技术熟练程度及主观判断能力等，所以必须严格按照标准化程序进行精液的采集与分析，从而保证精液分析结果真实反映受检者相关信息。在世界卫生组织第5版操作手册[5]及之前版本中，对精子浓度、活力、形态等的检测有明确详细规定，但有学者对手册的实际指导作用持怀疑态度[6-7]，有文献指出，美国有5%的实验室不能提供有关精子浓度的数据，6%的实验室没有精子活力相关数据，15%的实验室缺乏精子形态学分析[8]。国内也有学者调查显示，有约53.6%的实验室人员在精液体积测量中操作不当，约70.9%的工作人员对液化不良的精液未采取任何措施即进行检测[9]。在评估精子形态时，83%的美国实验室[8]以及69%的英国实验室[10]观察计数不到100个精子就报告最终结果。另外，在同一实验室内及不同实验室之间，精液分析结果可因缺乏统一标准、缺少质量控制措施、缺乏熟练度及缺乏人员培训和继续教育而存有较大差异[11-14]。因此有学者就目前所报道的精液质量是否真实反映了受检者的真实水平持怀疑态度[15-16]，国内虽有很多专家对精液分析的质量控制进行研究和探讨[4,17-21],但是很少有人指出在具体执行过程中保证精液分析的质量控制措施，本文将对此进行阐述。

精液分析的质量控制总体上可从分析前、分析中和分析后的质量控制。

1 分析前的质量控制

1.实验室必须满足卫生部关于男科实验室的建设要求[22]。在人员组成、仪器设备、实验室使用面积、区域划分及安全防护等方面至少满足最低要求。

2.每日监控实验室温度、湿度，冰箱与水浴箱温度，并按照仪器校正要求对仪器进行定期校正。

3.患者进行精液采集前确保禁欲时间在48 h～7 d之间；当一次精液检测异常时，应至少连续检查3次，两次精液分析时间间隔在7 d以上，但不超过3周，最好保持相同的禁欲时间。

4.在收集患者精液的一次性无菌容器(取精杯)上标注患者姓名、年龄、病历号及禁欲时间等基本信息。

5.口头或书面交代患者手淫方式,取全部精液并收集于一次性无菌容器(取精杯)内，取精前需洗手及清洁外阴。

6.虽然有学者[23]建议采用患者在家采取并于2～3 h内送到实验室的精液，但取精最好在实验室附近的私密的房间(取精室)内进行，保证取精室内舒适的温度和不易受干扰的环境，最好配备有影视播放设备，以利于患者取精。

7.对于手淫取精困难的患者可用特殊安全套以性交方式取精，再收集于一次性无菌容器内。

8.对于取精室之外取出的精液，要将容器贴身保存，以免温度过低影响精子活力，并记录精液取出的时间。

9.接收标本时核实患者姓名，并询问是否将全部精液取出，有无精液丢失情况，并将精液置于37 ℃水浴箱帮助液化，每隔5 min观察液化情况。

10.制作精液分析登记本，用于记录患者姓名、病历号、取精时间、有无取精困难、精液有无丢失、丢失前段还是后段及液化时间等。

2 分析中的质量控制

1.按照WHO第5版手册[5]标准对液化情况、精液体积、外观、黏稠度、pH进行判定并记录;

2.加样应使用0.5～10 μL量程加样枪加完全混匀精液标本5 μL，加样过程中避免产生气泡，加样枪使用结束应调到最大量程；

3.加样后立即将计数板置于恒温平台上，调节视野，电脑分析软件中输入患者信息和精液体积、外观、黏稠度、pH等信息，即可进行计算机辅助精子分析；

4.计算机辅助精子分析过程中，视野选择应远离边缘至少一个视野，按“之”字形方向进行，视野之间不可重复或重叠；

5.通过显微镜微调及光圈对每一视野进行调节，尽量保证每个精子都被标记，并尽量少的标记非精子成分，之后手动除去非精子成分；

6.因计算机辅助精子分析将不动精子视为死精子，所以应对所有标本都进行精子活率染色，以确定精子活率；

7.对可疑为无精子症的精液标本一定要离心后观察沉淀，之后再做判定。

3 分析后的质量控制

1.核实取精杯上患者信息与报告单上是否一致；

2.检测结束后仔细用流水冲洗精子计数板，擦拭表面水分后倒扣在干净纱布上，不可用漂洗液浸泡计数板；

3.在精子动态结果记录本上对患者信息及分析结果进行详细记录；

4.每天工作结束后清洁工作台面，实验室地面，关闭仪器电源(培养箱、冰箱除外)；

5.每月对当月所有精液检测结果(精子浓度、精子活力)进行总结分析，对实验室结果进行监测。

为了达到精液分析的质量控制目的，除了上述分析前、分析中和分析后应注意的各方面外，还应有相应的规章制度可供遵循。这些规章制度可以借鉴国内外的文献[24-25]，也可以由各实验室根据经验自己编订。主要包括以下几点：

1.实验室操作手册的制定：实验室应按照操作标准严格制定实验室操作手册，每个工作人员应严格按照编制的操作手册中操作步骤进行操作，从而保证实验室内工作人员操作过程的一致性，有利于发现问题；

2.建立仪器设备档案：包括设备名称、型号、启用日期、运行状态、维修保养及校正记录等；

3.建立试剂耗材登记本：详细记录试剂耗材从申领到使用的过程，包括产品名称、型号、生产厂家、生产日期、有效期及启用日期等，每月要有详细的盘存记录；

4.制定详细的工作人员职责，并对实验室工作人员进行职业素质教育，树立强大的责任心，保证在值班、日常质控、操作登记、检测分析及结果记录的每一步都留有操作者的痕迹，以便于监测精液分析中的人为因素；

5.制定实用性的质量控制方案并严格执行，制定随时质控本、周质控本、月质控本等，及时记录分析每次质控结果，并讨论学习，及时发现问题，解决问题；

6.对实验室人员特别是新进人员进行系统化培训，并组织实验室内部业务学习，不断更新知识，当对操作手册进行修改时，应记录，及时进行总结分析；定期选派实验室人员外出进修学习，互通有无，不断丰富现有理论体系；

7.建立实验室自查制度，对实验室制度规范、操作及运行进行定期和不定期的自查，建立自查记录本，发现问题讨论解决，及时纠正错误。

总之，在整个精液分析的质量控制中要做到以下4点：①写你所做，把所要做的每一件事，每一个操作文字化，做到有章可循，有据可依；②做你所写,严格按照文字化的操作规范做每一件事，每一个操作，做到有章必循，有据必依；③记录已做,详细记录每个操作，将其可见化，做到有案可稽，有证可循；④分析已做,对操作进行总体分析和归纳总结，通过对比研究及时发现不足，不断丰富和完善现有操作规范和体系。希望通过以上各点的注意和学习，能使得每个工作人员都参与到精液分析的质量控制中来，保证精液分析质量控制有效的进行。

参考文献：

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