分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达在早产与足月中的差异表达分析

谢莉莉

（深圳市妇幼保健院儿科，广东 深圳 518000）

分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达在早产与足月中的差异表达分析

谢莉莉

（深圳市妇幼保健院儿科，广东 深圳 518000）

目的分析分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达在早产与足月中的差异表达。方法回顾性分析2012年9月至2013年9月我院收治的60例剖宫产分娩的孕妇的临床资料。结果早产组孕妇的IL-8基因表达和孕周呈正相关（P＜0.05），但是足月产组孕妇的IL-8基因表达和孕周无显著相关（P＞0.05）。两组孕妇的OTR、PGHS-2基因表达均和孕周无显著相关（P＞0.05）。结论分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达在早产与足月中的差异表达差异显著，可能受到早产进程的影响。

分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达；早产；足月；差异表达

本研究对我院近一年来收治的60例剖宫产分娩的孕妇的临床资料进行了回顾性分析，探讨了分娩相关基因白细胞介素-8（IL-8）、缩宫素受体（OTR）及前列腺素H合成酶-2（PGHS-2）表达在早产与足月中的差异表达，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012年9月至2013年9月我院共收治48例剖宫产分娩的妊娠32～36+6周孕妇，其中有31例孕妇早产临产（PTL），17例患者早产未临产（PTNL）。将这些患者作为早产组，另选取我院同期收治的12例剖宫产分娩的妊娠37～42周孕妇作为足月产组，其中有6例孕妇足月临产（TL），6例孕妇足月未临产（TNL）。两组患者各基线资料之间的差异均不显著（P＞0.05），具有可比性。具体见表1、表2。

1.2 方法

1.2.1 标本采集和处理

在子宫下段剖宫产手术时，取出胎儿后从子宫切口边缘将所有孕妇的肌层组织采下来，放在4 ℃的温度下保存，运用0.9%的氯化钠液对血迹和羊水进行冲洗，然后在低温冻存管中放置组织，立即向液氮中投入，长期保存以备用[1]。

1.2.2 qRT-PCR

内参为人GAPDH。上海生物工程有限公司对以上引物进行合成纯化。将50～75 mg冻存的子宫肌层选取出来进行组织匀浆，在对总RNA进行提取时严格依据RNeasy Mini Kit试剂盒（QIAGEN）说明书，在对总RNA反转录成cDNA时严格依据qRT-PCR试剂盒（TaKaRa）说明书，将无菌去离子水作为阴性对照。荧光定量PCR反应体系：12.5 μL 2×SYBR Premix Ex Taq Ⅱ，1μL上游引物，1μL下游引物（表3），2Μl cDNA模板，8.5μL无菌去离子水，反应总体积是25μL。PCR设定参数：95 ℃预变性30 s；95 ℃ 20 s；IL-8的退火温度为59 ℃，OTR的退火温度为59 ℃，PGH S-2的退火温度为60 ℃，GAPDH的退火温度为60 ℃，退火时间30 s；72 ℃ 20 s；共对40个循环进行扩增[2]，见表3。

表1 两组孕妇的年龄、孕次、产次、孕周、宫口比较

表2 两组患者的剖宫产指证比较

表3 引物序列和片段长度[3]

表4 IL-8、OTR、PGHS-2mRNA和孕周的相关性分析

1.2.3 Western blot及半定量分析

清洗PBS之后依据1 mL/g组织将RIPA裂解液加入，并在第一时间运用玻璃匀浆器在冰上进行20 min的匀浆，在4 ℃的温度下进行15 min的离心，离心速度为12 000 r/min，将上清取出来，运用BCA法定量后将30 μg的蛋白样品取出来进行SDS- PAGE并向0.45 Lm PVDF膜上电转移，在室温下震荡封闭5%脱脂奶粉2 h，然后分别用1∶250稀释的OTR和PGH S-2-抗4 ℃孵育过夜，内参为β-actin（1∶2000）。完成孵育后TBST进行4次洗膜，每次7 min。然后再和HRP标记的1B5 000二抗室温孵育1 h，TBST进行5次洗膜，每次5 min。将发光液加入其中后在暗室运用X线片显影。在对各组的蛋白积分光密度进行分析时运用Quantity One 软件，目的蛋白表达水平=目的条带积分光密度值/对应的β-actin的积分光密度。重复同一实验3次，取平均值[4]。

1.3 统计学处理

2 结 果

见表4。

3 讨 论

早产属于一种妊娠并发症，在临床极为常见，极易引发新生儿患病和死亡。分娩的过早发动是其发生的根本原因，也就是说，子宫组织从静止期过早转化为激活期，但是目前临床还没有弄清楚其具体机制。既往相关医学研究表明，在分娩的启动和维持过程中，分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2发挥着至关重要的作用，但是在早产子宫肌层中，临床还没有弄清楚这些分娩相关基因的表达[5]。

本研究中，荧光定量PCR检测IL-8、OTR、PGHS-2mRNA 的表达情况为在子宫下段肌层中，PTL组孕妇的IL-8 mRNA水平明显比TL组低，但明显比PTNL组和TNL组高（P＜0.05）；PTL组孕妇的PGHS-2mRNA水平明显比TL组低，但明显比TNL组高（P＜0.05），和PTNL组之间的差异不显著（P＞0.05）；各组孕妇的OTRmRNA水平之间的差异均不显著（P＞0.05）。Western blot检测IL-8、OTR、PGHS-2蛋白的表达情况为在子宫下段肌层中，各组均没有检测出IL-8蛋白的表达，各组的OTR蛋白均具有丰富的表达，各组间表达之间的差异均不显著（P＞0.05）；TL组孕妇的PGHS-2蛋白表达水平明显比TNL组高（P＜0.05），但PTL和PTNL组孕妇的PGHS-2蛋白表达水平之间的差异不显著（P＞0.05）。IL-8、OTR、PGHS-2mRNA和孕周的相关性分析显示，早产组孕妇的IL-8基因表达和孕周呈正相关（P＜0.05），但是足月产组孕妇的IL-8基因表达和孕周无显著相关（P＞0.05）。两组孕妇的OTR、PGHS-2基因表达均和孕周无显著相关（P＞0.05），和相关医学研究结果一致。

综上所述，分娩相关基因IL-8、OTR及PGHS-2表达在早产与足月中的差异表达差异显著，可能受到早产进程的影响。

[1] 曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2008:99.

[2] 乐杰.妇产科学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2009:92.

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R72

B

1671-8194（2014）17-0091-02

2012年深圳市科技计划项目，项目名称：早产相关基因表达对胎儿发育和出生体重的影响（立项项目编号：201203102）