不同卷烟接装纸中菌落总数的测定

张 亮, 李小龙, 王 颖, 刘贤杰, 谢 涛



不同卷烟接装纸中菌落总数的测定

张 亮*, 李小龙, 王 颖, 刘贤杰, 谢 涛

(深圳烟草工业有限责任公司 技术中心, 广东 深圳, 518109)

采用平板计数法测定了10种市售卷烟接装纸的菌落总数, 结果表明: (1) 平板计数法适用于卷烟接装纸菌落总数的测定; (2) 平板计数法检测接装纸菌落数重复性较好, 同一稀释度(1:10)平行样检测结果的相对标准偏差(RSD)小于30%, 同一样品平行样RSD小于20%; (3) 不同接装纸样品差异性显著, 同一厂家接装纸样品差异性不显著; (4)所测接装纸中的菌落总数均符合行业限量标准, 可判定为合格.

卷烟接装纸; 菌落总数; 平板计数法

食品中菌落总数是卫生检测中的一项很重要的指标, 是判定食品被细菌污染程度的标记. 菌落总数的检测一般是采用倾注平板计数法进行, 其准确性、灵敏性均较高[1—2]. 接装纸是将烟条与滤嘴卷接在一起的纸, 消费者在抽吸卷烟时, 滤嘴直接接触嘴唇, 接装纸中的有害成分会通过口腔进入体内, 因此, 接装纸的卫生安全会影响到消费者的身体健康. 目前, 已有一些文献关注了接装纸中有害成分的检测[3—6], 但关于接装纸中菌落总数测定的报道较少. 本文参照食品中菌落总数的检测方法[7], 检测了10种市售卷烟接装纸的菌落总数, 所得结果与烟用接装纸标准对比, 以期为吸烟的健康研究提供参考.

1 材料与方法

1.1 材料、试剂和仪器

选择10种市售卷烟进行研究, 接装纸样品由深圳烟草工业有限责任公司提供, 分别编号为: A、B、C、D、E、F、G、H、I、J. 样品信息如下.

A: 如意-好日子, 浙江立可达包装材料有限公司; B: 吉祥-好日子, 云南玉溪接装纸销售有限公司; C: 精品-好日子; D: 阳光-好日子; E: 软珍品-好日子; F: 硬珍品-好日子; G: 软锦绣-好日子; H: 卓越-好日子; I: 盛世-好日子, C—I样品均由高邮市卫星卷烟材料有限公司提供; J: 经典双喜, 浙江立可达包装材料有限公司.

抽样完成后装在灭菌的封闭袋内, 保存在4 ℃冰箱内, 并在24 h内完成检测.

试剂: 胰蛋白胨, 青岛高科园海博生物技术有限公司; 琼脂、酵母浸膏, 广东环凯生物科技有限公司; 葡萄糖, 天津市光复科技发展有限公司; 磷酸二氢钾、氯化钠, 国药集团化学试剂有限公司.

仪器: BP 210S电子天平, 感量0.000 1 g, 德国Sartorius公司; HWS24型恒温水浴锅、BPN-80CRH培养箱,上海一恒科学仪器有限公司; BSC-1300ⅡA2型生物安全柜,苏州安泰空气技术有限公司; 90 mm无菌培养皿, 广州洁特生物过滤制品有限公司; DELTA320型pH计, 瑞士梅特勒-托利多公司; BA-2S拍击式均质器, 上海本昂科学仪器有限公司.

1.2 方法

1.2.1 培养基和试剂配制

参照相关标准[7]配制平板计数琼脂培养基、磷酸盐缓冲液和无菌生理盐水.

1.2.2 接装纸样品准备

玻璃器皿、试管、移液枪等实验用品均做灭菌处理. 在超净工作台中打开样品密封袋, 抽取处于中间的接装纸样品. 为缩短样品暴露在空气中的时间, 应尽快完成各项准备. 称取5 g样品, 剪至0.2 cm × 0.2 cm大小, 每个样品制备2个平行样, 记作A-1, A-2; B1, B2; … J-1, J-2.将样品加入到盛有45 mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋内, 拍打均质2 min, 制成1:10样品匀液, 每个样品制备3个平行样, 记作S-1, S-2, S-3. 移取1:10样品匀液1 mL, 沿着管壁加入到盛有9 mL稀释液的无菌试管中, 振荡试管, 使其混合均匀, 即制成1:100样品匀液. 按1:100样品匀液的配制方法, 配制1:1 000和1:10 000样品匀液. 再吸取1 mL空白稀释液, 加入到3个无菌平皿内作为空白对照.

表1 接装纸样品在不同稀释度菌落总数

注: ①空白对照、1:1 000和1:10 000稀释度的平皿中均没有观测到菌落, 不予列出, “-”表示未检测到; ②所有稀释的平板菌落数均小于30 CFU, 则应按1:10稀释倍数计算, 取10倍结果; ③菌落数小于100 CFU时, 按“四舍五入”原则修约作为检测结果.

1.2.3 培养

将20 mL置于46 ℃恒温水浴中保温的平板计数琼脂培养基倾注平皿, 并转动平皿使其混合均匀, 待琼脂凝固后, 将平板倒置, 置于(36 ± 1) ℃培养箱中培养(48 ± 2) h.

1.2.4 菌落计数

用肉眼直接观察, 记录稀释倍数和相应的菌落数量. 菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units, CFU)表示.

2 结果与分析

2.1 方法适用性

接装纸样品菌落总数检测结果见表1, 由表1可知, 所有接装纸样品均检出菌落. 该方法操作步骤相对简单, 灵敏性较高. 由于接装纸样品中菌落总数较少, 稀释度在1:100以上时就已观察不到菌落, 因此, 该方法只需将样品稀释到1:100稀释度就能达到检测要求, 且检测所需平皿数量较少, 检测效率较高.

2.2 测试结果重复性

由图1可以看出, 不同样品1:10稀释度下, 平行样菌落数的相对标准偏差值(RSD)除I-1样品外均在30%以下. 从图2可以看出, 同一样品不同平行样检测的RSD均在20%以下,说明平板计数法用于接装纸中菌落数检测时准确度较高, 重复性较好[8].

图1 同一稀释度(1:10)下平行样菌落数测定的相对标准偏差

图2 同一样品平行样菌落数测定的相对标准偏差

2.3 检测结果判断

每个卷烟接装纸中菌落数由1:10稀释度决定, 通过对A—J样品1:10稀释度6个平行数据进行差异显著性分析, 单因素方差分析的值为0.000 74, 由此可见不同接装纸样品菌落数差异显著.

接装纸样品C—I为同一厂家生产, 通过对A—J样品1:10稀释度6个平行数据进行差异显著性分析, 单因素方差分析的值为0.183 4, 说明由于同一生产厂家的生产工艺差异较小, 所以不同接装纸菌落数差异不显著.

烟草行业对于接装纸的行业标准[9]要求接装纸中菌落数须小于200 CFU/g, 因此, 所检测样品符合限量要求.

3 结论

本文采用平板计数法检测了10种接装纸中的菌落总数, 结果表明: 不同接装纸样品菌落数差异显著, 而同一厂家不同接装纸样品中菌落数差异不显著, 且10种市售接装纸样品菌落数的检测结果符合行业限量规定, 可判定为合格. 另外, 平板计数法在检测接装纸中菌落数时有较好的适用性, 且方法的重复性较为理想.

[1] 廖茂彬, 陈向标, 赖明河. 食品中菌落总数的国标法测定注意事项及微生物快速测试卡法检测[J]. 中国食物与营养, 2013, 19(7): 16—18.

[2] 杨静. 食品菌落总数检测结果出现异常现象的原因分析[J]. 疾病监测与控制, 2014, 8(1): 46—47.

[3] 韩云辉, 孙兰成, 宋继炯, 等. 接装纸中汞、砷、铅等8种元素的分析研究[J]. 中国烟草学报, 2001, 7(4): 1—6.

[4] 王艳, 姚孝元, 韩云辉, 等. 卷烟接装纸、成型纸中荧光增白剂ABP、VBL的HPLC测定[J]. 烟草科技, 2007(11): 40—44.

[5] 唐纲岭, 边照阳, 杨飞, 等. 烟用接装纸、内衬纸和卷烟条与盒包装纸中18种邻苯二甲酸酯的测定[J]. 烟草科技, 2012(9): 36—40.

[6] 侯英, 曹秋娥, 谢小光, 等. 热脱附和气-质联用测定卷烟包装材料中的酞酸酯[J]. 光谱实验室, 2006(5): 134—137.

[7] GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定[S].

[8] 庞永强, 陈再根, 侯宏, 等. 抽吸方式对卷烟主流烟气烟草特有亚硝胺释放量的影响[J]. 烟草科技, 2009, 2: 46—49.

[9] YC 171-2009 烟用接装纸[S].

The determination of the total number of colonies on different tipping papers

ZHANG Liang, LI XiaoLong, WANG Ying, LIU XianJie, XIE Tao

(Technology Centre, Shenzhen Tobacco Co, Ltd, Shenzhen 518109, China)

The total number of colonies of 10 commercially available tipping papers was determined by the plate count method, and the results show that: (1) the plate count method is suitable for the determination of the total number of colonies of the tipping papers; (2) the reproducibility of the plate count method is relatively stable, the relative standard deviation(RSD) of the same dilution parallel (1:10) was below 30%, and the RSD of the same sample parallel is below 20%; (3) the difference between the different tipping papers is significant, while the difference among the tipping papers from the same manufacture is not; (4) the total number of colonies determined of all the 10 tipping papers is conforming the tobacco occupation limited standard.

cigarette tipping papers; total number of colonies; plate count method

10.3969/j.issn.1672-6146.2014.04.020

TS 41+1

1672-6146(2014)04-0078-03

email: zlliangzhang@126.com.

2014-07-22

(责任编校: 江 河)